第三章 基因工程 知识点题库

（1） PCR过程所依据的原理是，利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物；PCR利用了DNA的热变性原理，DNA受热变性后解链为单链，冷却使与DNA模板链结合，然后在的催化下进行互补子链的合成．细胞内DNA复制时解链是在的催化下完成的．

（2） cDNA文库中的Rubisco酶基因（填“含有”或“不含有”）启动子和内含子．检测Rubisco酶基因是否转录出mRNA采用技术．通过对Rubisco酶基因进行改造从而实现对Rubisco酶的改造属于工程．

（3） 改造Rubisco酶基因能够显著的提高植物的光合作用速率体现了基因通过控制．进而控制生物体的性状．

（1） 如图是利用果汁进行果醋发酵的装置。发酵初期不通气，溶液中有气泡出现；中期可以闻到酒香；后期接种醋化醋杆菌，适当升高温度并通气，酒香逐渐变成醋香。回答下列问题：

①制取果汁时，先用果胶酶将果胶分解成 和半乳糖醛酸甲酯等物质，再用

酶处理，可得到比较澄清的果汁。

②发酵初期不通气，溶液中出现的气泡是，该气泡是由（填微生物）产生的。

③后期通气的原因是。对获得的醋化醋杆菌可用液体培养基进行培养，该液体培养基的配方不包括（A．蛋白胨 B．酵母提取物     C．甘露醇     D．尿素）。

④在发酵的整个过程中，某物质浓度随时间变化的示意图如下，该物质是 。

（2） 如图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。请回答下列问题：

①由①到②通常先用合适的酶分别切割 Ti 质粒和含抗虫基因的 DNA，然后借助酶连接以形成重组 Ti 质粒。若含抗虫基因的 DNA 序列已知，可用方法对其进行扩增。

②由④到⑤经过培养基中营养物质和的诱导，可发生类似受精卵发育成胚的过程，即从单细胞依次到细胞团、球形胚、心形胚和，最后再生出完整的植株。若⑤表现出性状，则表明转基因成功。

③基因工程在多个领域具有广阔的应用前景，基因工程的应用不包括（A．可以定向改变生物的性状；B．可以迅速使某种生物形成群落；C．可以生产人们需要的某些蛋白质；D．可以治疗人类的某些遗传病）。

（1） 从基因结构分析，与基因组文库中的基因相比，cDNA文库中获得的目的基因少了 等结构（至少写两个）。

（2） 将获得的胰岛素基因导入受体菌内，并在受体菌内维持稳定和表达的过程，在基因工程中称为 。

（3） 过程⑤需将纤维素膜上的细菌裂解，释放出，再用³²P标记的作为探针进行杂交。依据杂交结果，应选取培养基上 （填字母）菌落继续培养，才能获得含有胰岛素基因的受体菌。

（4） 经过目的基因的检测和表达，从大肠杆菌中获得的“胰岛素”未能达到期待的生物活性，导致这种差异的原因可能是。

（5） 与从基因组文库获取目的基因相比，图示方法获得的目的基因在受体菌中更容易表达，原因是。

（1） 酒是由多种酶经过一系列生化反应的产物，在我国利用酒曲酿酒历史悠久。回答下列问题：
①酿制前需要将糯米蒸煮，蒸煮目的除灭菌外，同时，淀粉被释放出来。与用葡萄酿酒相比，利用糯米酿酒，需增加的过程，该过程主要是由酒曲中的黑曲霉、黑根霉分泌产生的催化下进行。在酿酒过程中二氧化碳的产生（填“早于”、“同时”或“晚于”）乙醇的产生。
②乙醇在酸性条件下，可被重铬酸钾氧化产生绿色的三价铬，故可采用法对酒中的乙醇含量进行定量；绘制标准曲线时，以作为纵坐标。
③酿酒时需关注酒变酸，但在乙醇发酵旺盛时，酒不会变酸的原因是。

（2） 非洲猪瘟是由ASFV（一种双链DNA病毒）感染猪引起的一种烈性传染病，对猪养殖造成巨大的威胁。某科研组利用基因编辑技术将ASFV外壳蛋白基因导入猪细胞中，培育得到自动产生ASFV抗体的基因编辑猪的过程如图所示，回答下列问题：

①培育基因编辑猪的过程中涉及、、早期胚胎培养和胚胎移植等技术。其中在基因编辑的过程中，需要应用的工具酶有。
②对1号猪用促性腺激素处理，使其。采集于2号猪的组织细胞经处理使细胞分散，置于CO₂培养箱中培养。常用技术来激活重组细胞。
③检测4号猪细胞含有ASFV抗体基因的方法是，用方法检测是否产生了ASFV抗体。

（1） 纤维细胞E6启动子基本组成单位为，基因表达载体除了图示组成外，至少还有等（至少答两个），构通的因表达载体的目的是使目的基因稳定存在并且可以遗传在下一代，使目的基因能够。

（2） PCR技术扩增β－甘露糖苷酶基因（GhMnaA2）原理是，该过程除需要根据设计特异性引物序列处为保证GhMnaA2能插入到质粒2中，还需要在引物的端添加限制酶识别序列。

（3） 为什么不能用GhMnaA2探针进行DNA分子杂交来鉴定基因表达载体是否导入棉花细胞？。

（4） ③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。用SmaI酶和NotI酶切割正义基因表达载体获得0.05kb、3.25kb、5.95kb、8.45kb四种长度的DNA片段，则用NotI酶切反义基因表达载体获得DNA片段的长度应是和。

（5） 导入细胞内的反义GhMnaA2能阻止β－甘露糖甘酶合成，使棉纤维更长原理是。

（1） 为获取phb2基因，提取该动物肝脏组织的总RNA经RT—PCR获得大量的目的基因，该过程使用到的酶有 。

（2） 图1为所用载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见表。为使phb2基因（该基因序列不含图1中限制酶的识别序列）与载体正确连接，在扩增的phb2基因两端需添加和两种限制酶的识别序列。双酶切避免了目的基因与载体的 连接，同时减少目的基因与目的基因、载体与载体的连接，以提高重组质粒的比例。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时，需使用的酶是。

（3） 转化前需用CaCl₂处理大肠杆菌细胞，使其处于态的生理状态，以提高转化效率。

（4） 将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养，随机挑取菌落（分别编号为1、2、3、（4）培养并提取质粒，用（2）中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图2，号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。

（5） 将纯化得到的pHB2蛋白以一定浓度添加到人宫颈癌细胞培养液中，培养24小时后，检测处于细胞周期（图3）不同时期的细胞数量，统计结果如图4。分析该蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖可能的原因是：将细胞阻滞在细胞周期的（填“G₁”或“S”或“G₂/M”）期。