一 目的基因的获得 知识点题库
①单链的脱氧核苷酸序列引物 ②目的基因所在的DNA片段 ③脱氧核苷酸
④核糖核苷酸 ⑤DNA连接酶 ⑥DNA聚合酶 ⑦DNA解旋酶
资料甲：科学家生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”．
资料乙：科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接，实现了对鼠源杂交瘤抗体的改造，生产出对人体的不良反应减少、效果更好的鼠﹣人嵌合抗体，用于癌症治疗．
资料丙：治疗性克隆是指把患者体细胞移植到去核卵母细胞中，构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出ES细胞，获得的ES细胞定向分化为所需的特定类型细胞（如神经细胞、肌肉细胞和血细胞），用于治疗．
（1）资料甲属于基因工程的范畴．构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生 末端．若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生（相同、不同）黏性末端的限制酶．
（2）构建的表达载体含有牛生长激素基因及其启动子等，其中启动子的作用是 ．将基因表达载体导入小鼠受精卵内常用 法．
（3）资料乙属于基因工程和细胞工程的范畴．鼠源杂交瘤抗体就是从免疫小鼠的脾脏细胞中获取B淋巴细胞，在诱导剂的作用下与 融合，形成杂交瘤细胞，并通过体内培养或体外培养生产单克隆抗体．这种抗体与普通血清抗体相比较，最主要的优点是 ， 可大量制备．
（4）资料丙中治疗性克隆采用的技术有、 和干细胞培养．
（5）ES细胞可从重组胚胎培养到囊胚时期的中分离．在培养液中加入可诱导ES细胞定向分化成所需的各种特定类型细胞．
基因工程被广泛应用于药物制备、动植物育种等，下图所示为基因工程在动物乳腺生物反应器﹣﹣转基因山羊和抗虫棉的培育过程．据图回答：
（1）在图示①过程中，使用的限制酶能够识别 的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，从而获得A．也可采用 （填技术名称）从人的DNA分子或苏云金芽孢杆菌中对已知序列的A进行分离并扩增．
（2）基因工程的关键环节之一是构建B，其完整结构至少包括 等部分，在此过程中除了使用工具酶外，还需使用的工具是
（3）在通过⑤过程形成转基因抗虫棉时，一般要用到植物组织培养技术，但若在③过程中采用 法则不需要；在形成转基因山羊C的过程中，需要从雌性动物体内取出卵，在②过程中通过 将目的基因导入 ，在形成转基因山羊的过程中除了基因工程技术外，还需要用到 技术．
（4）由于转基因表达产物存在于山羊的乳汁中，检测其体内是否出现药用蛋白，在分子水平上的检测方法是从转基因生物中提取蛋白质，用 ， 表明目的基因已形成蛋白质产品．
①目的基因与运载体结合；②将目的基因导入受体细胞；③目的基因的检测与鉴定；④提取目的基因．
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（1） 基因工程的核心是构建 ． 用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时，不能使用Sma I切割，原因是 ． 重组质粒中抗生素抗性基因可作为标记基因，原因是 ．
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（2） 将日的基因导入植物细胞时，采用最多的方法是 ． 目的基因进入受体细胞后的表达过程中，启动子需与识别和结合，从而驱动转录过程．最终目的基因是否成功翻译咸蛋白质，常用的方法进行检测，若出现杂交带，表明目的基因已形成蛋白质产品．
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（1） 过程①中，需利用限制酶处理表达载体1．为了大量获得猪bmp基因，可用技术，该技术需要用到的酶是．
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（2） 目前对动物细胞培养所需的营养条件还没完全研究清楚，培养受体细胞时往往需要添加等天然成分．同时还需在培养液中添加一定量的，以防污染．
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（3） 在实验结果的基础上，提取上述猪肌肉细胞的（mRNA/DNA），利用标记的EGFP基因作探针，进行分子杂交，可进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因．
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（4） 据实验结果推测，猪bmp15基因在细胞特异性表达．
注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四种限制酶，箭头指向的位置为限制酶的切割位置；Amp′是氨苄青霉素抗性基因，Neo′是G418抗性基因．
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（1） 重组质粒上的抗生素抗性基因可作为，其作用是有利于筛选出含有目的基因的细胞，氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞，而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neo′的小鼠细胞，结合如图推测，过程①选用的2种限制酶是
（选填图中的编号），图中③处的培养液应添加（填“氨苄青霉素”或“G418”）．
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（2） 若图中过程①选用的2种限制酶识别序列和切割位置分别是
和 
，则经这两种限制酶切割后所产生的黏性末端是，此时，图中过程②应选用（填“E•coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）．
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（3） 据图分析，细胞乙内除线粒体DNA外，还有个DNA分子；细胞乙发育成桑椹胚的过程中细胞分裂方式是，将细胞乙培养成桑椹胚的技术称为技术．
资料1：巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达【5′AOX1和3′AOX1（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子】．
资料2：巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达．
资料3：限制酶切位点
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（1） 如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上、限制酶识别序列，这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化．
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（2） 酶切获取HBsAg基因后，需用将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取．
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（3） 步骤3中应选用限制酶来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞．
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（4） 为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用方法进行检测．
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（5） 转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达．
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（6） 与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行并分泌到细胞外，便于提取．
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（1） 构建透明质酸酶基因表达载体时，使用的载体往往有特殊的标记基因，其作用是；所用的DNA连接酶将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的，对所连接的DNA两端碱基序列（有/没有）专一性要求。早期用大肠杆菌作为受体细胞，后来发现毛霉或酵母菌更具优势，最可能的原因是。
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（2） 透明质酸酶基因上的一段核苷酸序列为“—ATCTCGAGCGGG—”，则对应该段核苷酸序列进行剪切的XhoⅠ酶识别的核苷酸序列（6个核苷酸）为。
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（3） 人体细胞间质有基膜粘连蛋白、多糖（如透明质酸）、蛋白多糖等成分。链球菌等致病菌在侵染人体时，可产生透明质酸酶。试分析透明质酸酶在链球菌侵染过程中的作用是，其意义可能是。
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（1） 为在短时间内获得大量目的基因，可用PCR技术进行扩增，其原理是
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（2） 若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是一
一，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是一 
一，那么在①过程中，应用限制酶切割质粒，用限制酶切割抗虫基因，才能至少保留一个标记基因。
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（3） 启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是别和结合的部位。
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（4） 通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有的培养基上，若大肠杆菊能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入。
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（5） 将目的基因导人马铃薯细胞使用了农杆菌转化法，要用处理土壤农杆菌，使之转变为感受态，然后将它们在缓中液中混合培养以完成转化过程。目的基因导入马铃薯细胞后，是否可以稳定存在和表达，要通过检测与鉴定。在分子水平上检测马铃薯的DNA上是否插入了目的基因的方法是。
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（1） 可利用PCR技术扩增HBSAg基因片段，其前提是，以便根据这一序列合成引物。扩增过程中应选择下图中的引物（填字母）与HBsAg基因片段结合。
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（2） 由上图可知，过程①用到的限制酶是，在培养农杆菌的培养基中添加可筛选得到含重组质粒的农杆菌。
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（3） 将含有HBSAg基因的农杆菌导入番茄细胞时，受损的番茄组织更有利于农杆菌的侵染，其原因是，HBSAg基因在番茄植株中遗传信息传递的一般规律为（用流程图表示）。
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（4） 转基因番茄的细胞具有全能性，在一定的以及无菌、适宜的pH和温度等条件下，可以形成愈伤组织，再进一步发育形成试管苗。过程④的实质是。用该植株结出的番茄果实饲喂小鼠，若在小鼠的血清中检测到，则说明转基因疫苗口服有效。
下列操作与实验目的不符的是（ ）
