第一章 发酵工程利用微生物进行规模化生产 知识点题库
尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用．生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，为探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如下表所示，实验步骤如图所示．
KH2PO4 | Na2HPO4 | MgSO4•7HO | 葡萄糖 | 尿素 | 琼脂 |
1.4g | 2.1g | 0.2g | 10g | 1g | 15g |
将上述物质溶解后，用蒸馏水定溶到1000mL，调pH为7.2 | |||||
（1）培养基中加入尿素的目的是 ，从物理形态看，培养基属于 培养基．“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的 和 ，为了满足图示锥形瓶中目的菌对氧气的需求，应采用的操作方法是 ．
（2）图中将细菌（非硝化细菌）转到培养基上时，应采用 法接种，获得单个菌落．接种环的灭菌方法是 ．初步筛选出来的菌种，还需要用生化的方法作进一步的鉴定：在此培养基中接种并培养初步筛选的菌种，若PH （降低/不变/升高），说明该菌种能够分解尿素．
（3）A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落．若造成A同学实验结果的原因是培养基被杂菌污染．为了确定该原因，操作思路是 ．
（1）培养硝化细菌时，将含有固体培养基的培养皿倒置的目的是 ．培养基中加入铵盐为硝化细菌的生长提供 ，培养基中没有加入有机碳，从功能上看这种培养基属于培养基．
（2）硝化细菌纯化并计数时，对照组应该涂布等量的 ．若实验组每个平板中的菌落数都超过了300，应对样本菌液进行 处理．
（3）实验：探究弱酸弱碱条件下硝化细菌对铵盐转化能力的大小．取含铵盐的液体培养基均分成 等分，其pH值可依次调节为 ，培养相同的时间后，可通过测定培养基中的 来判断硝化细菌分解能力的大小．
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（1） 培养基中加入化合物A的目的是，这种培养基属于培养基。
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（2） “目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的。实验需要振荡，培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是。
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（3） 在上述实验操作过程中，获得纯净“目的菌”的关键是。
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（4） 某同学计划统计污水池中“目的菌”的总数，他选用10-4、10-5、10-6稀释液进行平板划线，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是，此对照实验的目的是。
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（5） 有同学将“目的菌”破碎并提取得到该菌蛋白质，之后一同学利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的、以及分子的形状等。而另一位同学则利用凝胶过滤法分离蛋白质（下图），他在操作中加样的正确顺序是。待蛋白质接近色柱底端时，用试管连续收集流出液。先收集到的蛋白质与后收集到的蛋白质的区别是。
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（1） 回答生物技术实践的相关问题：
①醋酸菌如果在充足、氧气充足的情况下，可以直接将葡萄糖变成醋酸；由于醋化醋杆菌不能直接利用淀粉等多糖类，所以，淀粉需要过程才能用来制醋，为了提高产量，往往筛选高产菌株，筛选出的高产菌株使用（工具）接种到上，放置于4 ℃的冰箱内进行保存备用。在酿醋前，将菌种放在锥形瓶内进行震荡培养，可用进行搅拌；
②植物的组织培养是快速繁殖的一种方法，将剪下的部分枝条先放在发芽培养基中培养，使之长出更多的，再进行培养后移入生根培养基中，待生根后，将幼苗移至中进行锻炼
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（2） 已知拟南芥植物多次培养后依然具有全能性，常用拟南芥进行多方面的研究和应用，原生质体培养就是常用的技术之一，
①原生质体的制备：选取生长到3-4周的拟南芥叶片，先用70%的酒精消毒后，用冲洗5次，将叶片切成0.5-1mm的小片放置于盛有的培养皿中，另取一培养皿，加入灭菌后的酶液，将叶片放入酶液，震荡酶解3小时，酶解后过滤出大组织块，滤液中是酶和原生质体混合物，将滤液可以通过方法进行分离。影响原生质体纯度的因素有（写2种）
②筛选出具有活性的原生质体，可将处理后的目的基因通过法导入到受体细胞，原生质体只有再生出后才能进行细胞增殖，拟南芥的全能性的表达程度主要取决于该植物的。
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（1） 柚皮易焦糊，宜采用 法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过 除去其中的固体杂质．
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（2） 筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或接种．对新配制的培养基灭菌时所用的设备是 ．实验前需对超净工作台进行 处理，对实验者的双手进行处理。
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（3） 培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供 ．
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（4） 抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈．可通过测定透明圈的 来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果．
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（1） 在制酒过程中一般是先通气后闭气，原因是： ；该过程的反应式是： 。
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（2） 在果醋的制作过程中起主要作用的微生物是，其细胞结构中含有的细胞器是，它的代谢类型是。
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（3） 腐乳味道鲜美，易于消化吸收，是因为微生物产生的蛋白酶将豆腐中的蛋白质水解为，而脂肪酶将脂肪水解为甘油和脂肪酸。
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（4） 从发酵条件看，泡菜出现的“咸而不酸”的原因可能是。
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（1） 小组成员分别称取了根、茎、叶并用75%的酒精浸泡适宜时间，再用无菌水冲洗，根、茎、叶属于豌豆的结构层次，用 75%的酒精浸泡的目的是，为验证该操作是否已达到目的，可进行的操作是（写出简单思路即可）。
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（2） 取上述根、茎、叶进行研磨获得滤液，将滤液接种在灭菌后的培养基上并放入恒温箱中培养48h。实验室中对培养皿常采用的灭菌方法为。灭菌后的培养基倒入培养皿后，为防止皿盖上的冷凝水滴落入培养基造成污染，可进行的操作是
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（3） 实验结果：接种根、茎、叶滤液的培养基上均出现菌落，可根据菌落的等特征判断其是否为同一种菌。接种根部滤液的培养基上所形成的菌落最可能属与菌（写出一种即可），挑取的单菌落可在温度条件为下进行临时保藏。
