第二节 获取纯净的微生物培养物 知识点题库
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（1） 步骤①和②中常用的工具酶是。
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（2） 经过①和②步骤后，有些质粒上的基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。
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（3） 步骤③是的过程。为了促进该过程，应该用处理大肠杆菌。
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（4） 步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选。能在C中生长的大肠杆菌有种。
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（5） 步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”）上，请在图中相应的位置上圈出来。
B . 
C . 
D . 
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（1） 回答与柑橘加工与再利用有关的问题：
Ⅰ.柑橘果实经挤压获得果汁后，需用果胶酶处理，主要目的是提高果汁的。为确定果胶酶的处理效果，对分别加入不同浓度果胶酶的果汁样品，可采用3种方法进行实验：①取各处理样品，添加相同体积的，沉淀生成量较少的处理效果好。②对不同处理进行离心，用比色计对上清液进行测定，OD值的处理效果好。③对不同处理进行，记录相同体积果汁通过的时间，时间较短的处理效果好。
Ⅱ.加工后的柑橘残渣含有抑菌作用的香精油及较多的果胶等。为筛选生长不被香精油抑制且能高效利用果胶的细菌，从腐烂残渣中分离得到若干菌株，分别用无菌水配制成，再均匀涂布在LB固体培养基上。配制适宜浓度的香精油，浸润大小适宜并已的圆形滤纸片若干，再贴在上述培养基上。培养一段时间后，测量滤纸片周围抑制菌体生长形成的透明圈的直径大小。从直径的菌株中取菌接种到含有适量果胶的液体培养基试管中培养，若有果胶酶产生，摇晃试管并观察，与接种前相比，液体培养基的下降。
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（2） 回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
Ⅰ.天然农杆菌的Ti质粒上存在着一段DNA片段（T-DNA），该片段可转移并整合到植物细胞染色体上。为便于转基因植物在组织培养阶段的筛选，设计重组Ti质粒时，应考虑T-DNA中要有可表达的目的基因，还需要有可表达的。
Ⅱ.结合植物克隆技术进行转基因实验，为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。若植物材料对农杆菌不敏感，则可用的转基因方法。
Ⅲ.利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程与利用茎段诱导产生愈伤组织再获得丛状苗的过程相比，前者总培养时间，且不经历过程，因而其遗传性状稳定，是大多数植物快速繁殖的常用方法。
Ⅳ.与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化形成，最终形成根。还可通过改变MS培养基促进生根，如（A.提高蔗糖浓度B.降低培养基浓度C.提高大量元素浓度D.不添加琼脂）。
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（1） 从物理状态来看CMC平板属于培养基，培养基中应以为唯一碳源，常用的灭菌方法是。
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（2） 富集培养后的菌种常采用法接种于CMC平板，培养一段时间后，可根据初步鉴定并挑取产纤维素酶菌株XZ-33。
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（3） 诱变选育高产纤维素酶的菌株时，通过向培养基中加入刚果红染液筛选出与菌落直径比大的菌落（刚果红能与纤维素形成红色复合物，但不与纤维素水解产物结合）。
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（4） 如图是筛选获得菌株UV-Col6过程中60Co-γ辐照剂量与致死率和正突变率（符合生产需要的突变菌数占诱变后活菌数的比例）的关系。实验结果表明，用60Co-y射线诱变处理时合适的辐照剂量为KGy。从基因突变的特点分析，正突变率低的原因是、。
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（1） MP培养基的成分为KH2PO4 2.25g/L、K2HPO4 2.75g/L、（NH4）2SO4 1.0g/L、MgCl2 0.2g/L、NaCl 0.1g/L、FeCl 0.02g/L、CaCl2 0.01g/L。在制作苯酚降解菌的富集培养基和平板分离培养基时，应在MP培养基的基础上，前者添加成分，后者添加成分，然后对培养基进行灭菌，灭菌的方法为。
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（2） 将等量的污泥样液均分两份，分别接种在相同体积的MP培养基和富集培养基中，摇床振荡培养，振荡培养的目的是。两种培养中，苯酚降解菌菌体密度较低的培养基是，原因是。将富集培养基中的菌液稀释并涂布在平板上，经过一段时间的培养，在平板上长出一些形态、大小和颜色不完全相同的菌落，这说明。
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（1） 下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。
成 分
含 量
蛋白胨
10.0 g
乳糖
5.0 g
蔗糖
5.0 g
K2HPO4
2.0 g
显色剂
0.2 g
琼脂
12.0 g
将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1 000 mL
根据用途划分,该培养基属于(填“选择”或“鉴别”)培养基,若要分离能分解尿素的细菌需将培养基中换成,若要鉴定分解尿素的细菌还需将伊红美蓝换成。
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（2） 培养大肠杆菌时,常用的接种方法是。
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（3） 培养大肠杆菌时,在接种前通常需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是。对已使用过的培养基及其培养物必须经过处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。
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（1） 在分离土壤中分解尿素的细菌时，人为提供的条件，同时抑制或阻止。
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（2） 在分离上述细菌时，常用到的培养基配方如下：
KH2PO4
1.4g
Na2HPO4
2.1g
MgSO4•7H2O
0.2g
葡萄糖
10.0g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL
其中，KH2PO4和Na2HPO4的作用是（答出两点） 葡高糖可为该菌的生长提供和，尿素[CO（NH2）2]（可以不可以）作为碳源，原因是。
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（1） 培养微生物的培养基的营养成分一般都有水、无机盐、等。 此外，还要满足微生物生长对pH、温度、湿度、氧气及特殊营养物质的需求。灭菌后的培养基在平板倒好后，需要随机选取若干个平板先行培养一段时间 ，这样做的目的是。
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（2） 滤膜法常用来检测饮用水中的大肠杆菌是否超标，这种测定方法的主要原理是大肠杆菌的代谢产物能与培养基中添加的伊红-美蓝反应，使菌落颜色量。若要长时间保藏大肠杆菌，可采用的方法是。
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（3） 果醋已经成为我们日常生活中饭桌上的常用饮料，具有一定的保健功能。果醋在发酵过程中利用的菌种主要是，其能产生多种酶，通过技术将其制作成商品重复使用。
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（1） 实验一：将酒曲用制成悬液后，分别取不同稀释度的酒曲悬液用接种法接种到培养基上，经培养后根据（写出三种）等菌落特征以及统计不同微生物的菌落数，发现酒曲中主要有两类微生物，即酵母菌和霉菌。研究者发现在液体中酵母菌比霉菌生长快；而酸性培养基中酵母菌比细菌生长更适宜。据此设计实验二将酵母菌从酒曲中进行分离。
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（2） 实验二：用小刀切开曲块，挖取米粒大小一块投入酸性蔗糖豆芽汁培养液中，然后置于25℃培养箱中培养两天。上述实验操作中，需要灭菌的物品或材料有。 培养两天后，可见培养液变浑浊，这是因为。
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（3） 实验三：取浑浊的培养液1mL转接到另一瓶酸性蔗糖豆芽汁培养液中并培养，如此重复多次。多次转接后，取稀释液用下图所示方法接种在蔗糖豆芽汁平板上。
①如图所示接种方法为，使用该接种方法的目的是。
②与酸性蔗糖豆芽汁培养液成分相比，蔗糖豆芽汁平板培养基成分中少了乳酸，请简要解释不再需要添加乳酸的原因是；同时培养基中添加了琼脂，这种成分改变的原因是。
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（1） 为了筛选能分解尿素的细菌，在配制培养基时需要添加KH2PO4和Na2HPO4 ， 其作用有（答出2点即可）。运用固定化脲酶技术处理含尿素废水时应采用法对脲酶进行固定化。
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（2） 要从土壤中分离目标菌，关键的实验思路是
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（3） 为对分离得到的菌种作进一步的鉴定，常在固体培养基中加入酚红指示剂，若菌落周围出现，可以初步鉴定该种细菌为目标菌，其原理是。出现上述变化，选出分解尿素能力强的菌种的思路是：。
