一、间接计数法知识点题库

下列有关生物技术和工程的说法正确的是（　　）

A . 胚胎工程和基因工程都要利用细胞培养 B . 制作果醋时应避免通入空气以保证有关菌种正常代谢 C . 测定土壤中能分解尿素的细菌数目，应采用平板划线法 D . DNA粗提取时，用95%的冷却酒精进一步纯化DNA

如图是某同学制作果酒和果醋的实验流程图以及预分离土壤中能分解尿素的细菌的培养基配方，请回答有关问题．

KH₂PO₄	Na₂HPO₄	MgSO₄•7H₂O
1.4g	2.1g	0.2g
蛋白胨	葡萄糖	尿素	琼脂
1.0g	10.0g	1.0g	15.0g

（1）图中方框内应该填写的实验步骤是，此步骤中起主要作用的微生物是，其发酵时（需要/不需要）氧气，适宜的发酵温度范围是．

（2）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？（能/不能），原因是

（3）如果想进一步对初步筛选得到的菌株进行纯化并计数，可采用的接种方法是．通常鉴定分解尿素的细菌的方法是在培养基中加入指示剂．

如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图．据图分析正确的是（）

A . 3号试管中的菌落稀释倍数为10³倍 B . 4号中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能是5号的10倍 C . 5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×10⁹个 D . 该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高

下列有关生物技术实践的叙述，不正确的是（）

A . 制作果醋时应不断通入无菌空气 B . 在土壤中分解尿素的细菌的分离和计数实验中，应采用平板划线法 C . 通过比色法来检测亚硝酸盐含量需要制备标准显色液 D . 利用DNA和蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同提取DNA

分离土壤中分解尿素菌的实验操作中，对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落影响最大的是( )

A . 制备浸出液的土壤取自土壤的表层 B . 涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌 C . 牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源 D . 接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒

图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。

（1）图中选择培养基应以为唯一氮源；鉴别培养基还需添作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成色。
（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较。
（3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码(终止密码有UAG、UGA和UAA)。突变基因转录的mRNA中，终止密码为，突变基因表达的蛋白质含个氨基酸。

分解尿素的微生物广泛存在于农田等土壤中，某生物实验小组尝试对分解尿素的微生物进行分离与计数，请回答下列问题：

（1）分解尿素的微生物含有的酶是，为筛选出能分解尿素的微生物，配制培养基时应以作为唯一氮源，因此该培养基属于培养基。
（2）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是。常用来统计样品中活菌数目的方法是。
（3）该小组对分解尿素的微生物进行计数时，在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是，然后将1mL样液稀释10000倍，在3个平板上用涂布法分别涂布0.1mL稀释液；经适当培养后，统计活菌数目，每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目，最后选取作为结果；3个平板的菌落数分别为39、42和45。据此可得出每毫升样液中分解尿素的微生物活菌数为个。

下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是（）

A . KH₂PO₄、Na₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B . KH₂PO₄、Na₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、葡萄糖、琼脂、水 C . KH₂PO₄、Na₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、尿素、琼脂、水 D . KH₂PO₄、Na₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水

下表是某同学列出的分离土壤中微生物的培养基配方，据此回答下列问题：

KH2PO4	Na2HP04	MgS04•7H₂O	尿素	葡萄糖	琼脂
14g	2.1g	0.2g	10g	10.0g	15.0g

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL

（1）从作用上看，该培养基属于培养基，提供氮源的物质是，细菌能利用该氮源是由于体内能合成酶。
（2）在对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定时，还需在培养基中加入指示剂，若指示剂变，说明有目的菌株存在。
（3）为了测定微生物的数量，接种时应采用法，某同学在4个培养基上分别接种稀释倍数为10⁶的土壤样液0.1 mL，培养后菌落数分别为180、155、176、129个，则每升原土壤样液中上述微生物的数量为个，测定的活菌数比实际活菌数（填“低”“高”或“基本一致”）。

请选出下列正确的操作步骤（）

①土壤取样 ②称取10g土壤取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中

③吸取0.1mL进行平板涂布 ④依次稀释至10¹、10²、10³、10⁴、10⁵稀释度

A .

B .

C .

D .

下列有关微生物培养的叙述，错误的是（）

A . 稀释涂布平板法能获得单菌落，可以用于计数活菌数目 B . 在对微生物进行培养前，需要对接种工具和培养物进行灭菌 C . 酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物生长有一定的抑制作用 D . 分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的碳源

微生物培养过程中，需通过选择培养或鉴别培养来筛选目标菌株。下列相关叙述不正确的是（）

A . 能够在选择培养基上生长出来的菌落一定是目标菌株 B . 培养基中加入抗生素能够筛选出具有相应抗性的菌株 C . 尿素分解菌能够将尿素分解为氨，使酚红指示剂变红 D . 纤维素分解菌能够分解纤维素，菌落周围出现透明圈

在许多生物实验中，为保证实验成功，需要对实验设备、用品及材料进行灭菌或消毒。下表所列实验、处理对象与处理方法的对应关系中，错误的是（）

选项	实验	处理对象	处理方法
A	植物组织培养	外植体	用70%的酒精和氯化汞（或次氯酸钠）消毒
B	土壤中分解尿素的细菌的分离与计数	涂布器	先用70%的酒精浸泡，再用酒精灯火焰灼烧
C	多聚酶链式反应扩增DNA片段	微量离心管、一次性吸液枪头	用70%的酒精消毒
D	分解纤维素的微生物的分离	选择培养基、鉴别培养基	高压蒸汽灭菌

A . A B . B C . C D . D

以下表格内容中，有错误的选项是（）

	检测物质或生物	检测方法	显示颜色变化
A	酒精	酸性重铬酸钾检测	蓝绿色
B	亚硝酸盐	比色法	玫瑰红色
C	分解尿素的细菌	脲酶检测法	红色
D	分解纤维素的细菌	刚果红染色法	红色变浅（出现透明圈）

A . A B . B C . C D . D

现从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如下图所示：

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请回答：

（1）欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，将土壤用进行一系列的梯度稀释，同一浓度的土壤稀释液应至少涂布个平板，通常以每个培养皿中有个以内的单菌落的那一组稀释倍数为最合适。
（2）接种后的培养皿于37 ℃的恒温箱中培养。若培养基中存在含脲酶的细菌，其菌落周围会出现，这是由于尿素被分解产生氨气，与该培养基中的产生的颜色变化，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。
（3）分离能利用尿素的细菌时所用的培养基在成分上最主要的特点是。
（4）下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的是______________

A . 称取葡萄糖、琼脂糖等培养基成分 B . 倒平板 C . 涂布平板 D . 微生物的培养
（5）制备实验所需的培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是和灭菌，对培养基进行灭菌的常用方法是。倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是。
（6）与LB全营养培养基上的菌落数相比，尿素培养基上只有少数菌落的原因是。

下列关于"分离以尿素为氮源的微生物"实验的叙述，错误的是（　　）

A . 从有哺乳动物排泄物的地方取土样，分离到目的微生物的概率高 B . 实验中所用LB固体培养基，与分离大肠杆菌所用LB培养基成分有不同 C . 对尿素固体培养基灭菌的方法是G6玻璃砂漏斗过滤 D . 在尿素固体培养基生长的微生物不一定都能分泌脲酶

下列叙述中不正确的是（　　）

A . 因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离 B . 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同 C . 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显少于选择培养基上的菌落数目，说明选择培养基已筛选出一些菌种 D . 如果得到了三个或三个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数

下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图，有关叙述错误的是（　）

A . 在配制步骤②③的培养基时，应先调pH再高压蒸汽灭菌 B . 步骤③纯化分解尿素细菌的原理是将聚集的细菌分散，获得单菌落 C . 步骤③采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素 D . 步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力

某些土壤细菌可将尿素分解成CO₂和NH₃ ，供植物吸收和利用。科研人员分离培养尿素分解菌的流程如图所示。回答下列问题：

（1）实验时，培养基通常采用的方法进行灭菌。A培养体系内的培养基中提供氮源的物质是。
（2）尿素分解菌可以葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是和。用移液管吸取1 mL样液后，注入①号试管中，使样本与稀释液充分混匀，依次操作后，④号试管中的细胞浓度是样本中的倍。
（3）在培养过程中，空白对照组一个平板上出现个别菌落，说明在此次培养过程中出现了现象。单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同的微生物，原因是。

下列关于微生物培养和分离的说法中，正确的是（　　）

A . 先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，红色的菌落为纤维素分解菌 B . 尿素分解菌合成的脲酶将尿素分解成氨后会使培养基 pH 下降 C . 统计尿素分解菌的数目时应该选择菌落数多的培养基进行计数 D . 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂可初步鉴定尿素分解菌

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