二、直接计数法 知识点题库

如图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是（     ）

①水②无机盐（不含氮）  ③NH₄ NO₃④尿素⑤葡萄糖⑥牛肉膏⑦蛋白胨⑧琼脂

[实验一：脂环酸芽孢杆菌的筛选和鉴定]

实验步骤：

a配制K氏培养基：

b取果园土壤，制备土壤稀释液：

c将土壤稀释液接种在K氏培养基平板上，培养后获得单菌落。

d对获得的目的菌落进行筛选和鉴定。

①K氏培养基的主要成分有酵母膏、蛋白胨和葡萄糖等，其中能提供生长因子的是。

②将上述步骤c初步分离得到的目的菌株制成菌悬液，于80℃水浴中热处理10min后，取0.1mL涂布接种到K氏培养基平板上，45℃培养48h。此操作的目的是。

A.用80℃水浴杀死杂菌和芽孢

B.用80℃水浴进一步筛选出耐热目的菌株

C.分离纯化目的菌株

D.给细菌补充新的营养物质

③用接种环将筛得的目的菌株插入到半固体K氏培养基中，如下左图。接种时为什么要靠近酒精灯火焰：。45℃培养4-5天后进行观察，能够判断是脂环酸芽孢杆菌生长的试管是。

[实验二：脂环酸芽孢杆菌控制方法的研究]

实验步骤：

a称取一定量的抑菌剂，配制成不同浓度的抑菌液。

b将实验一得到的菌株原液适当稀释得到菌株稀释液。

c分别取不同浓度的抑菌液加入到K氏培养液中，再分别加入菌株稀释液形成菌悬液

（各试管中加入的同一种液体均为等量）。培养一段时间后，将上述菌悬液分别接种到K氏平板培养基上。

①实验二中，对照组的设置应该是：。

②为便于检测抑菌剂的抑菌效果，宜采用哪种接种方法?_ ，为什么? 。

①配制图示中的培养基不能加抗生素，原因是抗生素不能发酵成酸奶。为防止杂菌污染，需要对培养基进行。

②接种微生物的方法有很多，图中过程③所示的方法为，用该方法统计样本菌落数时，需要同时做A、B、C 三个培养皿，目的是。实验时检测时，若各取0.1mL已稀释10⁵倍酸奶分别接种到图示A、B、C培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每毫升酸奶样品中的乳酸杆菌数为个。

从微生物培养角度看，鲜奶相当于培养基，鲜奶中加入酸奶相当于。上述步骤该同学能否成功制得酸奶？试述理由。 。

①对于酵母菌的培养，比较适合它的培养基为（A.马铃薯蔗糖培养基B.MS培养基C.LB培养基D.牛肉汤培养基），除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的。

②欲知道这种微生物的繁殖速度，可用涂布分离法或对酵母菌进行计数。对培养到某一时期的培养液制备成10^-5的稀释液进行涂布分离，接种量0.1mL，三个培养皿生长的菌落数依次为25个、32个、18个，则培养液中的酵母菌数量为个/mL。

③在乙醇发酵中，通常采用以下步骤获取菌种→菌种→扩大培养→接种→发酵。不同微生物或同种微生物在不同环境条件下进行的代谢活动，所形成的代谢产物不同，使发酵食品的风味也不同。有时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能发生了（用反应式表示）。

④对于发酵产物的获取，通常要经过，为了容易分离得到产物常对微生物细胞进行。

①科学家发现紫杉醇的抗癌机理是：紫杉醇能和微管蛋白聚合体相互作用，促进微管聚合并使之稳定，阻碍纺锤体的形成，从而阻碍。

②利用植物组织培养，让细胞产生紫杉醇是一条理想的途径。此培养方法的原理是。

③由于植物细胞壁的存在，植物的有一定的难度，可用处理该细胞，获得球形的原生质体，通过对原生质体的培养，获得能产生紫杉醇的。

④在获得原生质体的过程中，常常在渗透压溶液中，目的是。

①从物理状态来看CMC平板属于培养基。富集培养后的菌种常采用稀释涂布平板法或法接种于CMC平板，培养一段时间后，可根据菌落特征初步鉴定并挑取产纤维素酶菌株XZ33。

②诱变选育高产纤维素酶的菌株时，通过向培养基中加入刚果红染液筛选出与菌落直径比大的菌落。

③下图是筛选获得菌株UV－Co16过程中⁶⁰Co－γ辐照剂量与致死率和正突变率(符合生产需要的突变菌数占诱变后活菌数的比例)的关系。实验结果表明，用⁶⁰Co－γ射线诱变处理时合适的辐照剂量为。

④图2所示培养基为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是。图1中甲培养基与乙培养基的成分相比，唯一的区别是甲中培养基无琼脂。在涂平板前需要对甲中的菌液进行稀释，如何确定样品的稀释操作是否成功？。

⑤甲、乙培养基都是选择培养基，如何确定该培养基能够对土壤中微生物起到筛选作用？。

⑥称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌个。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，除了上述的活菌计数法外，也是测定微生物数量的常用方法。