第二节分子生物学技术知识点题库

聚合酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述30多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55 ℃下复性(引物与DNA模板链结合)→72 ℃下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是

A . 变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键 B . 复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C . 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 D . PCR与细胞内DNA复制相比所需酶的最适温度较高

新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术(或仪器)与应用匹配正确的是（）

A . PCR技术——扩增蛋白质 B . 杂交瘤技术——制备单克隆抗体 C . 光学显微镜——观察叶绿体的基粒 D . 花粉离体培养——培育多倍体植物

从2001年初到现在，青岛某实验基地已孕育出上百只转基因克隆羊，它们的体内分别携带包括β—干扰素、抗凝血酶素、乙肝表面抗原在内的多种药用蛋白基因。这意味着，它们可以通过产奶的方式源源不断地提供药用蛋白基因，其应用前景非常光明。在其实验研究过程中，经常利用PCR技术制取大量的有关药用蛋白基因来供实验用。下列有关PCR技术的叙述中，不合理的是（）

A . PCR扩增反应中加入引物的作用是结合在模板DNA上，提供DNA延伸起始位点 B . DNA聚合酶的作用是从引物的5'端开始催化DNA链的延伸。 C . PCR技术依据是DNA的热变性原理 D . PCR的反应过程一般经历三十多个循环，每次循环都包括变性、复性、延伸

实验室常用PCR技术对DNA进行体外扩增，下列相关叙述正确的是（）

A . 需要解旋酶和耐高温的DNA聚合酶 B . 反应过程包括变性→复性→延伸 C . 95℃时DNA的磷酸二酯键断开 D . 引物与模板结合后向5’方向延伸

黑麦草具有抗除草剂草甘膦的能力，是因为黑麦草拥有编码抗草草甘膦的基因．科学家利用该基因．通过转基因技术获得了抗除草剂草甘膦的玉米新品种．培育新品种过程中用到了PCR技术（如图所示），请回答下列问题：

（1）通过反转录法得到文库，从中选取抗草甘膦酶的基因．该方法获得的目的基因缺少基因表达所需的调控序列，即．
（2）体外获得大量编码抗草甘麟酶的基因要利用PCR技术，该技术所依据的原理为，图中物质A是，B酶是．
（3）将目的基因导入植物细胞有多种方法，最常用的是．
（4）若需要对转入抗草甘麟基因的玉米进行个体生物学水平的鉴定，需要对玉米做操作．
（5）若实验结果不理想，为了提高抗草甘麟酶活性，可以通过工程设计和改造编码抗草甘麟酶的基因．

在基因工程中，若一个DNA分子片段如图，现欲利用PCR技术使其数量大量增多，复制时应给予的条件是（　　）

①ATGTG、TACAC模板链 ②A、U、G、C碱基

③A、T、C、G碱基 ④脱氧核糖 ⑤引物

⑥DNA聚合酶 ⑦ATP ⑧DNA水解酶 ⑨脱氧核苷酸．

A . ①④⑥⑧⑨ B . ①③④⑤⑦⑨ C . ①②④⑥⑦⑧ D . ①⑤⑥⑦⑨

如果要用PCR扩增以下DNA模板中的基因1，需要的一对引物序列是（　　）

5′CTTCGAAATTC﹣基因1﹣TCTCCCGATCGG﹣基因2﹣AAGATCAAATCCTTTGCTCT3′．

A . 引物Ⅰ是5′﹣CTTCGAAATTC﹣3′，引物Ⅱ是5′﹣CCGATCGGGAGA﹣3′ B . 引物Ⅰ是5′﹣CTTCGAAATTC﹣3′，引物Ⅱ是5′﹣TCTCCCGATCGG﹣3′ C . 引物Ⅰ是5′﹣GAAGCTTTAAG﹣3′，引物Ⅱ是5′﹣AGAGGGCTAGCC﹣3′ D . 引物Ⅰ是5′﹣GAAGCTTTAAG﹣3′，引物Ⅱ是5′﹣CCGATCGGGAGA﹣3′

多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术．PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）．下列有关PCR过程的叙述中不正确的是（　　）

A . 变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现 B . 复性过程中引物与DNA模板链的结合遵循碱基互补配对原则 C . 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 D . 与细胞内DNA复制相比，PCR技术所需要酶的最适温度较高

下列有关PCR技术的叙述，错误的是（）

A . 变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键 B . 复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的 C . 延伸过程中需要TaqDNA聚合酶、ATP、四种脱氧核苷酸 D . PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高

在胚胎工程中，对牛、羊等哺乳动物移植前的胚胎进行性别鉴定，然后植入受体，可以控制后代的性别，但这种控制是在精子和卵子受精后，胚胎本身已经有了性别的前提下进行的，这种方法耗时长，对胚胎损伤大。SRY基因是Y染色体上的性别决定基因，SRY—PCR胚胎性别鉴定技术能准确鉴定早期胚胎性别，应用前景十分广阔。请回答与SRY—PCR法鉴定胚胎性别相关的问题：

（1）用SRY—PCR法鉴定胚胎性别需要充足的材料并保证被测胚胎的活性，因此，首先从被测胚胎中取出几个细胞，提取，然后用的一段脱氧核苷酸序列作引物，进行PCR扩增。
（2）进行PCR扩增时，需用为模板，以为原料，反应体系中还应加入适量的酶。
（3）鉴定扩增产物，首先制备具有基因特异性的探针，探针需用等作标记，出现阳性反应者，胚胎为性。

基因工程中可以通过PCR技术扩增目的基因。回答下列问题。

（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是。

下列关于生物工程中常见的几种酶的叙述，正确的是（）

A . DNA连接酶可把目的基因与载体的黏性末端的碱基黏合，形成重组DNA B . 限制性核酸内切酶将一个DNA分子片段切成两个片段需消耗两个水分子 C . Taq酶是用PCR仪对DNA分子扩增过程中常用的一种耐高温的DNA连接酶 D . 纤维素酶和果胶酶处理植物细胞获得原生质体，便于植物杂交育种

PCR扩增时需考虑高质量的基因组DNA模板以及反应体系中各种成分的优化组合，相关叙述错误的是（）

A . 反应体系中模板DNA的量和纯度影响PCR的成功与否 B . 设计引物时需考虑引物的长度、碱基序列和GC含量 C . Taq酶的浓度过低会引起非特异性扩增产物量的增多 D . 目标DNA的获得取决于引物在模板DNA上的结合位置

甲型流感病毒为RNA病毒，易引起流感大规模流行。我国科学家在2017年发明了一种制备该病毒活疫苗的新方法，主要环节如下：

（1）改造病毒的部分基因，使其失去在正常宿主细胞内的增殖能力。以病毒RNA为模板，利用酶，逆转录成对应DNA后，利用技术扩增，并将其中某些基因（不包括表面抗原基因）内个别编码氨基酸的序列替换成编码的序列。与改造前的基因相比，改造后的基因表达时不能合成完整长度的多肽（蛋白质），因此不能产生子代病毒。将该改造基因、表面抗原等其他基因分别构建重组质粒，并保存。
（2）构建适合改造病毒增殖的转基因宿主细胞。设计合成一种特殊tRNA的基因，其产物的反密码子能与（1）中的终止密码子配对结合，并可携带一个非天然氨基酸（Uaa）。将该基因与连接后倒入宿主细胞。提取宿主细胞的进行分子杂交鉴定，筛选获得成功表达上述tRNA的转基因宿主细胞。
（3）利用转基因宿主细胞制备疫苗。.将（1）中的重组质粒导入（2）中的转基因宿主细胞，并在补加的培养基中进行培养，则该宿主细胞能利用上述特定tRNA，翻译岀改造病毒基因的完整蛋白，产生大量子代病毒，用于制备疫苗。特殊tRNA基因转录时，识别其启动子的酶是。
A．病毒的DNA聚合酶 B．宿主的DNA聚合酶

C．病毒的RNA聚合酶 D．宿主的RNA聚合酶
（4）上述病毒活疫苗与传统疫苗相比，具有的优点是：。

2017年CAR-T疗法获批可用于癌症治疗。其核心是将具有肿瘤识别功能的CAR基因整合到人体T淋巴细胞，形成能准确定位并杀死癌细胞的CAR-T细胞，请回答下列问题：

（1）已知CAR基因的全部序列，科研人员通过法和PCR技术可获得大量该基因片段。在PCR反应体系中除模板外还需加入。
（2）治疗基本过程是：分离患者T细胞并构建CAR-慢病毒运载体→体外基因转移形成CAR-T细胞→筛选、培养CAR-T细胞→输入患者体内，该疗法属于治疗，该运载体进入人体细胞的方式通常是。该方法采用的是自身T细胞，而不用异体T细胞，其原因是。
（3）为检查CAR基因能否在T细胞中翻译成蛋白质，可采用法检测，CAR-T细胞培养基中通常需加入等天然成分，传代培养时，贴满瓶壁的细胞需要用处理后再进行分瓶培养。

PCR技术（多聚酶链式反应）是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，下图表示合成过程。下列说法错误的是（　　）

A . a过程高温使DNA变性解旋，该过程不需要解旋酶的作用 B . c过程要用到的酶在高温下失活，因此在PCR扩增时需要再添加 C . 如果把模板DNA的两条链用¹⁵N标记，游离的脱氧核苷酸不标记，控制“94 ℃～55 ℃～72 ℃”温度循环3次，则在形成的子代DNA中含有¹⁵N标记的DNA占25% D . PCR中由碱基错配引起的变异属于基因突变

PCR是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术，与人体细胞内DNA分子复制相比，下列有关叙述错误的是（）

A . 都遵循碱基互补配对原则 B . DNA聚合酶作用的最适温度不同 C . 都是边解旋边复制的过程 D . 复制方式都是半保留复制

实时荧光RT-PCR可用于RNA病毒的核酸检测，其原理是：在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团，新链延伸过程中，DNA聚合酶会破坏探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT-PCR进行核酸检测的相关过程如图所示。下列说法错误的是（）

A . 若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者没有感染病毒 B . 做RT-PCR之前，需要先根据cDNA的核苷酸序列合成引物和探针 C . 需要将样本中的RNA反转录为DNA后再进行扩增 D . 病毒的检测还可以检测病毒引发产生的抗体，其原理是抗原-抗体杂交

重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，经过多次PCR扩增。从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA，不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景，下图表示利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。下列叙述正确的是（）

A . 引物中G＋C的含量越高，引物与模板DNA结合的稳定性越高 B . 在第一阶段由于引物2和引物3发生碱基互补配对，因此两者置于不同反应系统中 C . 引物1、2组成的反应系统和引物3、4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生4种双链DNA分子 D . 在引物1、2组成的反应系统中，经第一阶段要形成图示双链DNA，至少要经过3次复制

干扰素是一类糖蛋白，具有抗病毒。抗肿瘤等作用，科技人员利用基因工程、胚胎工程等将哺乳动物转变成“批量生产药物的工厂”。下图为利用奶牛生产抗病毒的特效药——干扰素的基本流程。回答下列问题：

（1）由干扰素mRNA形成cDNA的①过程称作。②过程为了快速获得更多的干扰素基因常常采用进行扩增。利用乳腺生物反应器生产干扰素，获得的干扰素基因应与启动子重组在一起，从而确保干扰素定位表达于动物乳腺。为检测干扰素基因是否表达，可以采用的方法。
（2）形成受精卵的⑤过程主要包括精子穿越放射冠和透明带，进入卵黄膜，。在这个过程中，防止多精子入卵受精的屏障有（填两点）。
（3）在进行过程⑦之前，需对早期胚胎进行筛选和鉴定，科研人员取囊胚滋养层的细胞，利用SRY基因（位于Y染色体上）探针进行检测，将检测反应呈（填“阳”或“阴”）性的胚胎进行移植。
（4）如果我们采用蛋白质工程来合成人干扰素，可以通过，对现有蛋白质进行改造，或制造新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需要。

第二节 分子生物学技术 知识点题库

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