灭菌技术知识点题库

近期网络上流行一种利用制作酸奶来判断牛奶好坏的方法，以下自制酸奶的方法也随之在网络广泛流传：

①将牛奶倒入玻璃杯，放在沸水中加热10分钟．

②降温到42℃，每杯牛奶加入0.15g酸奶发酵剂．

③用干净小勺搅拌均匀，在杯子外封上保鲜膜．

④在42℃下保温5小时后，放在4℃冰箱中冷藏1小时．

请回答相关问题：

（1）牛奶在沸水中加热10分钟，属于（消毒/灭菌）的方式，你推测酸奶发酵剂中含有的成分是，第②步降温到42℃的目的是，第③步封上保鲜膜的目的是．
（2）为了进一步提高酸奶的品质，有人提议对酸奶中的菌种进行进一步的纯化并设计如下操作：
①配制培养基：培养基中除含有微生物生长所需的、水和无机盐，还需添加的特殊营养物质是．
②接种：用接种环在培养基上进行接种的方法称为，接种前后接种环都需要经过进行灼烧灭菌．
③培养：接种后的培养基放入恒温箱中培养12h．
④观察并记录结果．一般说来，在一定的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，可以通过观察菌落的（答出三个即可）等特征对微生物进行初步的分类．
（3）酸奶中的多种活菌对健康有益，若要检测不同酸奶中各种有益菌的数量是否达标，可采用法．该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数量．

某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答下列问题。

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（1）培养基中加入化合物A的目的是，这种培养基属于培养基。
（2） “目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的。实验需要振荡，培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是。
（3）在上述实验操作过程中，获得纯净“目的菌”的关键是。
（4）某同学计划统计污水池中“目的菌”的总数，他选用10^-4、10^-5、10^-6稀释液进行平板划线，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是，此对照实验的目的是。
（5）有同学将“目的菌”破碎并提取得到该菌蛋白质，之后一同学利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的、以及分子的形状等。而另一位同学则利用凝胶过滤法分离蛋白质（下图），他在操作中加样的正确顺序是。待蛋白质接近色柱底端时，用试管连续收集流出液。先收集到的蛋白质与后收集到的蛋白质的区别是。

下列关于无菌操作的叙述，错误的是( )

A . 对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌 B . 将用于微生物培养的培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 C . 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D . 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触

下列实验室培养微生物的操作措施中，不能获得较纯菌种的是（）

A . 土壤样品灭菌处理后进行稀释涂布分离纯化 B . 培养皿、接种工具和培养基等进行灭菌 C . 操作过程需在酒精灯火焰旁进行并在适宜条件下培养 D . 如果是固体培养基，则需把培养皿倒置

某研究团队拟从餐厨垃圾中分离具有高效降解能力的微生物，并制成菌制剂，用于餐厨垃圾高效无害化处理。设计实验如下：

步骤一：取一定量的餐厨垃圾样品，筛除大块杂质后，装入无菌袋中密封，备用。

步骤二：配制用于培养菌种的培养基，配方如下：

成分	蛋白胨	牛肉膏	氯化钠	琼脂
含量（g/L）	10	15	10	5

步骤三：制备样品稀释液，并将不同浓度的样品稀释液涂布于平板培养基表面进行培养，48h后观察结果。

步骤四：对20种菌种进行分离纯化。为了比较这些菌种对餐厨垃圾的降解效果，分别配制含有餐厨垃圾主要成分（淀粉、蛋白质、脂肪和纤维素）的培养基，分别用于测定各菌种对其主要成分的降解效果，并进行测定。图表示其中4种菌种（X1-X4）在淀粉培养基上的培养结果，表3为这四种菌的测定结果。

四种菌种对餐厨垃圾各成分的降解系数

菌种编号	淀粉（D/D₀）	蛋白质（D/D₀）	脂肪（D/D₀）	纤维素（D/D₀）
X1	2.26±0.20	2.26±0.08	1.06±0.05	1.17±0.05
X2	1.90±0.08	1.90±0.08	1.10±0.09	1.05±0.11
X3	1.78±0.05	1.78±0.19	1.20±0.11	3.13±0.26
X4	2.09±0.07	2.09±0.08	2.10±0.02	2.39±0.14

备注：降解系数（D/D0）越大，降解效果越明显。

（1）根据配方可知，该培养基属于

A . 固体培养基 B . 液体培养基 C . 通用培养基 D . 选择培养基
（2）在涂布过程中需要用到的工具有

A . 无菌圆纸片 B . 无菌玻璃刮铲 C . 酒精灯 D . 接种环 E . 无菌滴管
（3）培养后，培养基上长出了35个菌落，通过观察菌落的，可初步判断是20种不同的菌种。为进一步确定菌种类型，还需从分子水平进行的检测方法是。
（4）写出图所示的测定菌种对淀粉降解效果的实验原理：。
（5）根据表中数据判断，降解餐厨垃圾能力最强的菌种是。

请回答下列有关微生物培养，应用和保存以及物质提取的问题：

（1）微生物培养过程常用的对涂布器进行灭菌的方法是。培养酵母菌常用到的培养基是（填名称）。
（2）从土壤中分离尿素分解菌的过程中，应向以尿素为唯一氮源的培养基中加入指示剂。
（3）对于需要临时保藏的菌种，首先要将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，等菌落长成后，再。对于需要长期保存的菌种，可以采用的方法。
（4）从橘皮中提取橘皮精油常用的方法是法，从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是法。

生物兴趣小组尝试运用所学的知识对某河段的大肠杆菌的数量进行检测。请回答下列相关问题：

（1）配制培养基时加入的乳糖属于培养基成分中的。对培养基进行灭菌时，一般使用法。灭菌后，待冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近。
（2）大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长呈黑色菌落，从功能上划分，该培养基属于培养基。
（3）在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是。
（4）检测大肠杆菌含量时，将1 mL河水样品稀释10倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的黑色菌落数分别为62、65和68。据此可得出每毫升样品中的活菌数为个。用该方法统计出大肠杆菌的数目比实际值（填“偏高”或“偏低”）。

夏日炎炎，空调是人们日常生活不可或缺的家电之一舒爽的凉风里可能藏着引发“空调病”的危险分子——嗜肺军团菌。该病菌被免疫细胞吞噬后不被分解而让自己不断扩增壮大，最终导致重症肺炎。回答下列问题：

（1）嗜肺军团菌的培养基的营养成分包括和特殊营养物质五大类，配制好的培养基通常采用法进行灭菌。
（2）为了避免培养基在培养过程中被污染，一般需将含有培养基的培养皿。为了排除培养基被污染，需设置接种等量的培养基作为空白对照。
（3）筛选获得的嗜肺军团菌株经鉴定后，将菌株进行液体扩大培养用于药物研究。培养时需要振荡，其主要目的是。为了测定培养液中的菌体数量，一般采用法将一定量的菌液接种到固体培养基上，该方法是通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数，一般选择菌落数在的平板进行计数。该方法使用时需对菌种进行梯度稀释，原因是。

薰衣草精油气味芳香，能够清热解毒，清洁皮肤，祛斑美白，深受女性朋友的喜爱，研究还发现薰衣草精油有抑菌作用。胡萝卜素是一种常用的食品色素，可分别从胡萝卜或产生胡萝卜素的微生物体中提取获得。请回答下列问题：

（1）为提高胡萝卜素的萃取率，萃取前要将胡萝卜进行，萃取液的浓缩可使用装置。
（2）薰衣草精油具有化学性质稳定，的特点，因此可用蒸馏法进行提取。将薰衣草和清水进行蒸馏后收集到的产物是，若要进一步分离出薰衣草精油，需向其中加入NaCl，其作用是。
（3）若要探究薰衣草精油对不同细菌的抑菌效果，实验时所用的培养基需进行高压蒸汽灭菌，不能选择干热灭菌，因进行干热灭菌的物品需具有的特点。高压蒸汽灭菌结束后，切断电源，等自然冷却到压力表为时，才能打开排气阀，若提前打开排气阀，将会造成的后果是锅内压力突然下降，灭菌容器内的液体会冲出容器，造成污染。

某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是

A . 培养基分装到培养皿后进行灭菌 B . 转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C . 接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D . 培养过程中每隔一周观察一次

尿素是一种重要的农业氮肥，过土壤中某些细菌分解为氨后，被植物吸收利用。某微生物的培养基配方如下：

KH₂PO₄	NaHPO₄	MgSO₄·7H₂O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	琼脂
1.4g	2.1g	0.2g	1.0g	10.0g	1.0g	15.0g

（1）依据配方将培养基配制好后，常采用法对培养基进行灭菌。
（2）培养基灭菌倒平板后，接种已经稀释过的土壤溶液，该培养基上生长的细菌（填“是”或“否”）都能分解尿素，原因是。
（3）将接种后的平板放在适宜条件下培养一段时间，发现部分菌落的周围出现透明圈，若要鉴定该菌落是否为尿素分解菌，需在培养基中添加指示剂，若透明圈变，则证明该菌落为尿素分解菌。

采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌（　　）

A . 接种环、培养皿、培养基、接种室 B . 培养皿、接种环、培养基、接种箱 C . 培养基、培养皿、接种环、接种箱 D . 培养皿、接种箱、培养基、双手

下列关于培养基的配制和灭菌，叙述正确的是（　　）

A . 配制培养基时，先进行灭菌，再调节pH B . 培养基的配制必须在酒精灯火焰旁进行 C . 将培养基转移到三角瓶和试管时必须用三角漏斗 D . 尿素固体培养基中除尿素以外的成分需在121℃下灭菌15min

下列关于无菌技术的叙述，错误的是（　　）

A . 对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒 B . 对微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 C . 使用高压蒸汽灭菌时，到灭菌时间后，先打开排气阀再切断热源 D . 为避免环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行

社会上流传着一些与生物有关的说法，有些有一定的科学依据，有些违反生物学原理。以下说法中有科学依据的是（　　）

A . 长时间炖煮会破坏食物中的一些维生素 B . 转基因抗虫棉能杀死害虫就一定对人有毒 C . 消毒液能杀菌，可用来清除人体内新冠病毒 D . 如果孩子的血型和父母都不一样，肯定不是亲生的

戴口罩、勤洗手是预防常见传染病的有效措施。为衡量某免洗洗手凝胶的清洗效果，研究人员检测了凝胶洗手前后，手部细菌的含量。凝胶洗手前的检测流程见下图。回答下列问题：

（1）在进行实验前需要配制培养基，通常包括计算、称量、溶解、调pH、分装、灭菌等环节，其中调pH的过程（填“需要”/“不需要”）在酒精灯火焰旁进行。为检验培养基是否灭菌彻底，可。
（2）为统计洗手前手部细菌的数量，应选择的接种方法是（填“稀释涂布平板法”或“平板划线法”）。除该方法外，还可使用血细胞计数板计数，但所得数据往往比前者。
（3）根据上图所示的步骤得出的实验结果可信度较低，为了提高实验结果的可信度，请给出两点建议：①，②。
（4）培养一段时间后可根据（至少填两项）等菌落特征初步判断培养基上菌种的类型。为了计算洗手前手部单位面积的细菌数量，除上图所给的信息外，还需要知道。

辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素的获得途径如图所示。回答下列问题：

（1）图中①和②分别表示辣椒组织培养中细胞的和过程，要获得脱毒苗，对外植体的取材要求是。
（2）图中培养外植体的培养基中常用的凝固剂是。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值(填“高”或“低”)时，有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时，常采用(填仪器名称)进行灭菌。
（3）图中外植体的消毒所需酒精的体积分数是。用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时，常用的酶是纤维素酶和。
（4）细胞产物工厂化生产是植物组织培养技术的重要应用，高产细胞系须在培养基培养至。再从中提取辣椒素。

红枣有“天然维生素丸”的美誉。利用红枣制作的红枣酒、红枣醋受到大家的喜爱。下图是红枣汁、枣酒、枣醋的生产流程。请回答下列问题：

（1）红枣果汁制作过程中，加入果胶酶的目的是；调配好的果汁要加热到70~80℃，保持15分钟，然后迅速装罐并封好罐口。该过程不用高压蒸汽灭菌法的原因主要是。
（2）大规模生产果酒时，要向发酵罐中加入活化的；为了提高生产效率，发酵初期应在（填“有氧”或“无氧”）条件下进行，目的是。
（3）过程④中要使果酒变成果醋，需要改变的条件有（答出3点）。

金黄色葡萄球菌（SAU）是细菌性肺炎的病原体之一。细菌性肺炎一般需要注射或口服抗生素进行治疗，当细菌出现耐药性时疗效下降。A，B，C，D四种抗生素均可治疗SAU引起的肺炎。为选出最佳疗效的抗生素，研究者分别将含等剂量抗生素A，B，C，D的四张大小相同的滤纸片a、b、c、d置于SAU均匀分布的平板培养基上，在适宜条件下培养48h，结果如图。下列相关叙述正确的是（）

A . A，B，C，D四种抗生素，抑菌效果最佳的是抗生素D B . 在进行实验前，应对培养基进行紫外线消毒 C . 为获取SAU均匀分布的平板，应使用平板划线法进行接种 D . 滤纸片b周围透明圈中出现一菌落，可能是该菌落发生了基因突变

灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是（　　）

A . 动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行 B . 微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染 C . 为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 D . 可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌

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