尿素分解菌的分离与计数 知识点

(一)实验原理:

(二)实验流程:
(1)土壤取样→富含有机质的土壤表层土
(2)样品的稀释→通常选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证获得菌落数在30~300之间、适于计数的平板
(3)接种→用稀释涂布平板法接种
(4)

(5)观察→根据菌落的特征区分微生物
(6)计数→统计菌落的数目
(7)计算→根据公式“每克样品中的菌落数=(C÷VM[C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数]”进行计算
(三)分解尿素的细菌的鉴别:

尿素分解菌的分离与计数 知识点题库

分离土壤中分解尿素的细菌,对培养基的要求是(    )

①加尿素    ②不加尿素    ③加琼脂    ④不加琼脂

⑤加葡萄糖  ⑥不加葡萄糖  ⑦加硝酸盐  ⑧不加硝酸盐

A . ①③⑤⑦ B . ①③⑤⑧ C . ②④⑥⑧ D . ①④⑥⑦
下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是(    )


A . 3号试管中的菌落稀释倍数为103 B . 4号中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为5号的10倍 C . 5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109 D . 该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高
下列关于高中生物学实验的叙述,正确的是(    )

A . 在制备果酒和果醋的实验过程中都要持续通入氧气 B . 分离土壤中不同种类的微生物需采用相同的稀释度 C . 将DNA粗提取后用二苯胺进行鉴定时需要进行水浴加热 D . 选择过氧化氢酶作为探究温度对酶活性影响实验的理想材科
下面是某同学制作果酒和果醋的实验流程图以及预分离土壤中能分解尿素的细菌的培养基配方,请回答有关问题。

  1. (1) 图1中方框内应该填写的的实验步骤是,此步骤中起主要作用的微生物是,其发酵时(需要/不需要)氧气,适宜的发酵温度范围是。 

  2. (2) 根据培养基的成分判断,该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌? (能/不能),原因是

  3. (3) 如果想进一步对初步筛选得到的菌株进行纯化并计数,可采用的接种方法是。通常鉴定分解尿素的细菌的方法是在培养基中加入指示剂。

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养细菌后,指示剂的颜色是( )

A . 蓝色 B . 红色 C . 黑色 D . 棕色
在做分离分解尿素的细菌实验时,A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落,而其他同学只选择出大约50个菌落.A同学的结果产生原因不可能有(  )

A . 由于土样不同 B . 由于培养基污染 C . 由于操作失误 D . 没有设置对照
人和哺乳动物的尿液中含有尿素,大量尿素的存在会对环境造成污染.土壤中有些细菌含有脲酶,可通过降解尿素作为其生长的氮源.某研究小组开展土壤中分解尿素的细菌的分离和培养实验.请回答下列问题:
  1. (1) 该实验中,在以为唯一氮源的培养基中加入指示剂,能产生脲酶的细菌在该培养基上生长一段时间后,其菌落周围的指示剂将变成色.
  2. (2) 在接种前需要添加空白对照组以检测培养基是否被污染,该空白对照组应采取的操作要求和观察指标是 . 若在实验中,一同学的平板上菌落平均数为36个/平板,而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落,这种结果说明在此实验中出现了现象.该同学将30(即36﹣6)个/平板作为本组菌落数的平均值,他的做法正确/不正确).
  3. (3) 另一同学在五个培养基平板下均接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1mL,培养一段时间后,平板上长出的细菌菌落数分别为13,156,462,178和191.该过程采取的接种方法是 , 每克土壤样品中的细菌数量为个.
尿素是一种重要的农业氮肥,但并不能直接被农作物吸收,需经土壤中的细菌将其分解成氨后才能被植物利用.土壤中的细菌种类繁多,某研究小组欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌并进行计数,请分析回答以下有关问题:
  1. (1) 该小组在寻找目的菌株时,要根据它对的要求,到相应环境中去采集土壤样品.
  2. (2) 该小组在实验室中进行微生物的筛选时,选用以尿素为唯一氮源的固体培养基,从功能上讲,该培养基属于培养基;该培养基的组分中,除了氮源外一般还应含有
  3. (3) 该小组采用稀释涂布平板法统计土壤溶液中活菌的数目时,为了保证结果的准确性,一般应选择菌落数在的平板进行计数.结果发现:统计的菌落数比活菌的实际数目低.分析其原因是:
  4. (4) 对得到的菌种如果要长期保存,可以采用的方法.
回答下列(1)、(2)小题:
  1. (1) 关于分离以尿素为氮源的微生物实验,请分析回答以下问题:

    Ⅰ、脲酶可以催化尿素分解为,其中碱性物质可以能使酚红指示剂变为

    Ⅱ、分离以尿素为氮源的微生物,培养基配制必须加凝固剂,培养基在g/cm2压力下灭菌30分钟,冷却至60℃,加入通过的尿素溶液,混合均匀待用。

    Ⅲ、为了从土壤中分离得到以尿素为氮源的微生物,分离效果比较好的操作方法是釆用,釆用该方法分离,土壤溶液必须经过处理。

  2. (2) 下图是科学家培育能生产人血清白蛋白乳腺生物反应器的过程,请回答相关问题:

    Ⅰ、要获取人血清白蛋白基因,可釆用PCR技术进行大量扩增,前提是

    Ⅱ、过程①获得的产物是。过程②需对卵细胞供体母牛进行处理。过程③常釆用方法。过程④通常将受精卵培养至阶段。并在进行过程⑤之前对胚胎进行筛选,选择胚胎进行移植。

    Ⅲ、若转基因母牛只有一条染色体上含有人血清白蛋白基因,该母牛与普通公牛杂交,产下转基因母牛的概率是

某生物兴趣小组探究不同C/N的比值对谷氨酸棒状杆菌数量和产物产生的影响,记录及其结果如下表。

回答下列问题:

组别

发酵条件

谷氨酸棒状杆菌

繁殖速率

单个菌体产

谷氨酸量

第一组

通入无菌空气、C/N=3:1

较慢

较多

第二组

通入无菌空气、C/N=4:1

较快

较少

  1. (1) 该兴趣小组进行实验时所用培养基除了能为谷氨酸棒状杆菌提供碳源和氮源外,还能提供的主要营养物质是
  2. (2) 统计待测培养液中谷氨酸棒状杆菌的数量,可采用的方法有显微镜直接计数法和稀释涂布平板法。

    ①利用显微镜直接计数法统计过程:取第二组的100倍的稀释液0.1mL滴加到计数板(由25×16=400个小室组成,容纳液体总体积为0.1mm3)在计数室内共有菌体48个,则1mL的第二组发酵液中有菌体个。用该方法测定的微生物数量大于实际的活菌数,原因是

    ②利用稀释涂布平板法统计的结果比实际值往往(填“偏大”或“偏小”),原因是

  3. (3) 根据表中信息可知,培养过程中需先将碳氮比设为4:1,目的是,然后将发酵液中碳氮比改为3:1继续培养,目的是
如表表格内容中,有错误的选项是(    )

检测物质或生物检测方法显示颜色变化
A大肠杆菌滤膜法菌落变黑
B亚硝酸盐比色法玫瑰红色
C分解尿素的细菌酚红指示剂检测法红色
D分解纤维素的细菌刚果红检测法红色变深

A . A B . B C . C D . D
下列有关微生物培养和菌种鉴定的叙述,正确的是(    )
A . 增加微生物的浓度常用的是固体培养基 B . 在无氮培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌 C . 在对微生物进行培养前,需要对微生物和培养基进行灭菌 D . 酵母菌发酵过程产生的酒精,对其他微生物生长有一定的抑制作用
下列关于菌种计数方法的叙述不正确的是(   )
A . 当样品的稀释度足够高时,能在培养基表面形成单个菌落 B . 应该选取培养基表面菌落数目稳定时的记录作为有效数据 C . 为了保证结果准确,一般采用密度较大的平板进行计数 D . 在某一浓度下涂布三个平板,以它们的平均值作为统计结果
在实验“分离以尿素为氮源的微生物”的无菌操作中,叙述错误的是(   )
A . 对土样进行梯度稀释过程需在无菌条件下进行 B . 加入尿素后的培养基需用G6玻璃砂漏斗灭菌 C . 接种时需使用无菌玻璃刮刀在酒精灯火焰旁涂布 D . 涂布菌液后的固体平板需要倒置在恒温箱培养
将菌种接种到LB全营养培养基的目的是(   )
A . 作为对照组,观察全营养培养基上细菌的菌落数 B . 作为实验组,分离以尿素为氮源的微生物 C . 作为对照组,分离以尿素为氮源的微生物 D . 作为实验组,观察全营养培养基上细菌的菌落数
可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是(  )
A . 以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂 B . 以尿素为唯一氮源的培养基中加入刚果红试剂 C . 以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂 D . 以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂
[选修一:生物技术实践]

反刍动物如牛和羊,具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物,其中许多微生物能分解尿素。某研究小组欲从瘤胃中分离尿素分解菌并对其进行计数,进行了相关实验。回答下列问题:

  1. (1) 配置培养基时,应以尿素作为唯一,该培养基属于选择培养基,原因是
  2. (2) 根据培养基中的菌落数推测样品中的活菌数时,需要先用对样品进行一定倍数的稀释,目的是保证
  3. (3) 为了鉴定培养基中生长的菌落是否是目标菌,需要向培养基中加入指示剂,若,则可初步确定所得微生物为目标菌。
下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验操作的叙述,错误的是(  )
A . 利用稀释涂布平板法准确估计菌落数目的关键是有恰当的稀释度 B . 若要判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置未接种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照 C . 该实验应采用稀释涂布平板法 D . 用以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后不会使酚红指示剂变红
如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图,有关叙述正确的是(   )

A . 在配制步骤②、③的培养基时,都应添加琼脂作凝固剂 B . 步骤③采用涂布平板法接种,并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素 C . 步骤③纯化分解尿素细菌的原理是将聚集的细菌分散,可以获得单细胞菌落 D . 步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种,分解尿素能力高的会产生更多得NH3 , 溶液pH更低
下列关于“分离以尿素为氮源的微生物”实验的叙述,正确的是(   )
A . 在尿素固体培养基上生长的细菌都是以尿素为氮源的细菌 B . 液体培养基振荡培养的目的是使微生物均匀分布以便涂布 C . 对含有尿素的培养基进行灭菌时,需降低高压蒸汽灭菌的压力与温度 D . 称取土壤、稀释土壤溶液、涂布平板这些操作都需要在酒精灯火焰旁进行