基因工程的基本工具简介 知识点
功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
作用部位：磷酸二酯键
特点：具有专一性和特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点。
（2）DNA分子的连接技术——DNA连接酶
功能：把两条DNA末端之间的缝隙“缝合”起来。
作用部位：磷酸二酯键
特点：只要在同一种限制性内切酶切割的两种DNA片段中加上这种DNA连接酶，它就会把片段缝合得天衣无缝。
（3）DNA分子的运载工具：能将外源基因送入细胞的工具。
种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。
作用：将目的基因转移到受体细胞，并利用它在受体细胞中对目的基因进行大量复制。
基因工程的基本工具简介 知识点题库
（1）基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性．利用基因工程等技术培育转基因生物时，基因工程的四步骤如下：
第一步：目的基因的获取．获取方法有 （写出两种即可）．
第二步：基因表达载体的构建．该步骤常用的工具酶是 ．完整的重组载体应具备 种特殊DNA片段．
第三步：将目的基因导人受体细胞．如受体细胞为动物的 ， 则常用的方法是显微注射法；如受体细胞为微生物细胞，则用 处理细胞，使其处于感受态，然后在一定温度下重组表达载体与缓冲液混合完成转化．
第四步： ．
（2）胚胎工程主要是对哺乳动物的胚胎进行某种人为的工程技术操作，然后让它继续发育，获得人们所需要的成体动物的新技术．
①体外受精：对精子进行获能处理的方法有 ．获能的精子与成熟的卵子需在 中完成受精作用．
②早起胚胎的发育：受精卵不断增殖的过程，细胞分化最先出现在 期．
③胚胎移植：适合移植的胚胎是 ．
①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④蛋白质 ⑤环状RNA ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居”
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（1） 限制性核酸内切酶作为基因工程的工具，其作用特点是．
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（2） 如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是；并且和的细胞也是不能区分的，其原因是．在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有的固体培养基．
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（3） 基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的模板来自于．
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（1） 真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A(有内含子)可以表达出某种特定蛋白(简称蛋白A)。回答下列问题
①某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是。
②若用家蚕作为表达基因A的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用作为载体，其原因是 。
③若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相比，大肠杆菌具有，（答出两点即可）等优点。
④若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是 (填蛋白A的基因”或蛋白A的抗体”)。
⑤艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是。
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（2） 某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉索抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因，有人将此质粒载体用BamH Ⅰ酶切后，与用 BamHⅠ酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题
①质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有，而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
②如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是： ，并且和的细胞也是不能区分的，其原因是。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，还需使用含有的固体培养基。
③基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于。
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（1） 获取乙型肝炎病毒表面抗原基因的方法有多种，如可根据表面抗原蛋白质的结构推测，进而推测目的基因的脱氧核苷酸序列，再进行人工合成。目的基因合成后可在Taq酶的作用下通过PCR技术大量扩增，该技术的原理是；扩增前要根据一段已知目的基因的核苷酸序列合成。
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（2） 目的基因在导入酵母菌细胞之前需要构建基因表达载体，该过程的工具酶有。基因表达载体中RNA聚合酶识别和结合的部位被称为。
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（3） 目的基因在受体细胞中是否翻译出蛋白质，可用技术来检测。若目的基因导入酵母菌细胞后未能稳定维持和表达其遗传特性，其原因可能是（答出两点即可）。
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（4） 实验证明，一定时间内间隔注射该疫苗3次效果更好，其主要原因是。
