【实验课题】酵母RNA的提取和鉴定
【实验目的】1.从酵母中提取RNA;2.鉴定RNA。
【实验原理】微生物是工业上大量生产RNA的原料,其中以酵母尤为理想,因为酵母核酸中主要是RNA,DNA很少,菌体易收集,RNA易分离。RNA不溶于乙醇和无水乙醚。利用稀碱法(稀碱能使细胞壁溶解)或高盐法(高浓度的盐改变细胞膜的通透性)来释放RNA。RNA水解液(加硫酸、加热)+苔黑酚-FeCl3试剂加热直到沸腾1分钟,会呈现墨绿色。
【实验材料】干酵母粉、离心机、烧杯、试管、玻璃棒等;0.2%氢氧化钠、95%乙醇、无水乙醚、乙酸、10%硫酸溶液、苔黑酚-FeCl3试剂等。
【实验步骤】
①称6克干酵母
②加0.2%氢氧化钠45mL,沸水加热20分钟,搅拌,后加乙酸7滴
③离心10分钟后取上清液
④边搅拌边缓慢加95%乙醇并静置10分钟
⑤离心后先用95%乙醇洗两次,再用无水乙醚洗两次
⑥获得RNA粗制品
⑦RNA鉴定
请根据实验方案,思考并回答下列问题:
相关操作 | 选取的试剂 | |
A | 破碎鸡血细胞 | 蒸馏水 |
B | 溶解核内DNA | 2mol/L NaCl溶液 |
C | 提取杂质较少的DNA | 冷却的95%的酒精 |
D | DNA的鉴定 | 双缩脲试剂 |
①利用鸡血细胞在低渗溶液中涨破的原理制备含DNA的滤液
②利用在不同浓度的NaCl溶液中溶解度差别粗提取和纯化DNA
③利用DNA不溶于乙醇的性质进一步纯化DNA
④利用DNA与二苯胺溶液显色反应对样本中的DNA进行鉴定
编号 | 实验操作及结果 | 结论 |
① | 用光学显微镜直接观察人口腔上皮细胞时,未观察到线粒体 | 人口腔上皮细胞不含线粒体 |
② | 一定浓度的过氧化氢溶液在90℃水浴加热下,产生气泡的速率大于常温下 | 加热可加快过氧化氢的分解 |
③ | 某生物组织样液中加入斐林试剂后直接观察,未产生砖红色沉淀 | 该生物组织不含还原糖 |
④ | 利用PCR技术扩增某目的基因,扩增产物中加入二苯胺试剂后加热变蓝 | 扩增产物含有该目的基因 |