备考2022年高考生物一轮复习专题 传统发酵技术的应用

（1） 回答与黄酒制作有关的问题：

氨基甲酸乙酯（EC）作为一种潜在致癌物，广泛的存在于发酵食品和酒精饮料中。在各种发酵酒中，黄酒面临的EC超标问题更为突出，利用酸性脲酶消除其前体物质尿素被认为是最为有效的一种方法。

①获取含有酸性脉酶菌的土样，加入制备成土壤悬液，并对土壤悬液中的酸性脲酶菌进行扩大培养。从适合使用的角度分析，该酸性脲酶菌应对富含的发酵液有很好的耐受性。
②常用于分离菌种的方法是，经过酸性培养基的初筛培养后，还要在添加酚红的中性固体培养基上进行复筛，应该挑选（填“有红色圈的菌落”或“无红色圈的菌落"）为目标菌株，最后将其接种在中，4℃冰箱中保藏。
 ③酸性脲酶菌的产酶能力受到许多因素影响，除培养基的营养成分、温度、pH外，在摇床培养时还应考虑。从酸性脲酶菌中提取脲酶，需要经过、取上清液等步骤获得粗酶提取液，进一步纯化后制备成固定化酶。若发酵液在一次流经酸性脲酶凝胶反应柱后，尿素含量仍高于产品标准，在不增加柱高的前提下，还可以通过措施来改进生产工艺流程。

（2） 烟草花叶病毒是导致烟草生产经济损失的主要病毒，造成的产量损失可达50%～70%。常利用植物细胞工程技术培育烟草品系来解决病毒感染问题。
①为控制病毒感染，可取部位进行植物组织培养获得脱毒苗，原因是。
②为了获得烟草花叶病毒的外壳蛋白基因（一种抗病毒基因），先要分离得到烟草花叶病毒的外壳蛋白，分析该蛋白质的氨基酸序列和相应的核苷酸序列，再利用获得该目的基因。依据基因工程原理，用对含抗病毒基因的DNA片段和Ti质粒进行处理，使它们的两端产生不同的黏性末端，从而避免基因片段自连接，获得更多适用的。
③用含有抗病毒基因的农杆菌侵染烟草带有伤口的叶片时，通过调控（写出一点），可提高转化效率。为检验抗病毒基因是否转入成功，从分子水平上可通过检测；从个体水平上可检测。 

（1） 如图所示是在苹果酒的基础上制作苹果醋的流程图。苹果酒制作是否成功，发酵后可在酸性条件下用溶液来鉴定。在酒精发酵旺盛时，醋酸菌（答“能”或“不能”）将果汁中的糖发酵成醋酸，原因是。

（2） 过程②常用的醋酸菌是可以在食醋中获得，分离和纯化该微生物的方法如下：

第一步：配制培养基。根据物理性质，纯化微生物常用的培养基为。

第二步：采用法对培养基进行灭菌处理。

第三步：接种。

第四步：培养温度控制在。

第五步：挑选符合要求的菌落。

（3） 某同学计划统计食醋中该发酵菌的总数，他选用10^-4、10^-5、10^-6稀释液进行涂布，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是，此对照实验的目的是。

（1） 取新鲜牛粪样品10g，加入装有90 mL无菌水的锥形瓶中，将锥形瓶固定在上，在37℃下振荡培养2～3d，进行选择培养。选择培养的目的是。

（2） 吸取锥形瓶中的培养液1 mL，加入盛有mL无菌水的试管中混匀进行稀释，依次稀释到10⁸倍稀释度。取不超过mL的10⁵、10⁶、10⁷倍稀释度的稀释液分别涂布于羧甲基纤维素钠培养基上，于37℃恒温培养箱中培养24h。

（3） 用接种环挑取颜色、形态不一的单菌落，使用法接种到羧甲基纤维素钠培养基上继续培养，重复2～3次，直至得到较纯的菌株。再挑选单菌落于增菌培养基中培养24h，吸取2µL点种到羧甲基纤维素钠平板中培养48h后，将培养基用溶液覆盖，10min后，倒去该溶液，再加入NaCl溶液，15 min后倒去NaCl溶液，测定透明圈的直径（H）和菌落直径（C），若数值大，则说明菌体增殖速率快，若比值大，则说明菌体分解纤维素的能力强。

（4） 对筛选出的菌株还要进行鉴定和酶活力测定，1个酶活力单位是指在温度为25℃，其他条件均为最适的情况下，。