实验步骤的目的 | 简要操作过程 |
供给淋巴细胞存活必需的营养等条件,同时防止培养过程中① | 用蒸馏水、无机盐、葡萄糖、氨基酸及促生长因子等制备合成培养基,还需添加适量的②等天然成分、植物凝集素(PHA,可促使淋巴细胞分裂),同时要添加适量的青霉素、链霉素,无菌处理 |
获取淋巴细胞 | 消毒、采集静脉血,滴加到培养瓶中,轻轻摇匀 |
将淋巴细胞培养至分裂高峰 | 将培养瓶置于37℃恒温CO2培养箱中培养24小时,水平晃动培养瓶,使③,再继续培养48小时 |
④ | 终止培养前2~3小时,加入秋水仙素溶液3~4滴后混匀,继续培养至结束 |
⑤ | 将培养液离心后,弃去上清液,加入0.075mol/L的KCl溶液(浓度略低于细胞内液),用吸管轻轻吹打细胞团混匀 |
观察细胞染色体核型 | 沉淀物中加入固定液处理,用Giemsa染色后,制片镜检 |