二、重组 DNA 技术需要三种基本工具 知识点题库
（1）用限制酶HindⅢ、BamH I同时切割目的基因，可得到 个DNA片段．
（2）用限制酶HindⅢ和BamH I切割Ti质粒，可得到 个DNA片段．
（3）过程①需要用到 酶．
（4）切割目的基因和质粒的酶与①过程的酶作用的化学键都是
（5）如果把目的基因直接注入植株细胞，一般会被植株细胞 ．
（6）构建重组质粒时，常用Ti质粒作为载体，是因为Ti质粒上具有 ，它能把目的基因整合到受体细胞（植株细胞）的 上．
（7）将目的基因导人植物细胞，除采用图中的方法外，还可采用 法和花粉管通道法．
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（1） 获得禽流感病毒和人流感病毒的RNA，经的作用合成DNA．PCR扩增合成的两种病毒的DNA片段时，所需的关键酶是．
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（2） 研究人员利用p质粒构建p﹣H5/H3共表达的重组质粒（如图），设计思路是：先将H5基因整合到p质粒（仅含有NheⅠ和XhoⅠ酶切位点）上，再将H3基因插入，获得重组质粒．为达到实验目的，需要在目的基因两端引入酶切位点，在H5基因两端需要引入酶切位点．
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（3） 重组质粒p﹣H5/H3中的启动子是识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA．除图中所示的组成外，重组质粒p﹣H5/H3中还应有等．
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（4） 研究人员将重组质粒p﹣H5/H3直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达出，不断进行体液免疫和细胞免疫，达到预防的目的．上述研究表明，通过将，可以实现一种基因疫苗预防多种疾病的目的．
回答下列有关基因表达和生物工程问题．
如图1所示为用PvuⅠ限制酶切下的某目的基因（4kb，lkb=1000个碱基对长度）及其上DNA片段示意图．
如图2所示为三种质粒示意图．图中AP为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因．EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离．复制原点是在基因组上复制起始的一段序列，是指质粒在受体细胞中复制时的起点．
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（1） 基因工程是生物工程核心技术．下列是分子实验室中构建产生胰岛素基因工程菌的部分操作，正确流程是．（用题中编号排序）
①筛选含有胰岛素基因的受体细胞 ②胰岛素基因与运载体重组
③重组DNA导入受体细胞 ④获取胰岛素基因
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（2） 片段D为目的基因中的某一片段，有关叙述正确的是 （多选）．A . 若图中的ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子 B . DNA连接酶作用于②处，DNA解旋酶作用于①处 C . 若只用片段D中的3个碱基对，则可以排列出43种片段 D . 同一脱氧氧核苷酸链中相邻的两个碱基之间依次经过“一脱氧核糖﹣磷酸基﹣脱氧核糖﹣”连接
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（3） 图2中质粒A、质粒C能否作为目的基因运载体最理想的质粒？（能/否）．为什么，
请说明理由．
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（4） 用EcoRⅠ完全酶切目的基因和质粒B形成的重组质粒（EcoRⅠ在目的基因和质粒上的酶切位点如上两图所示），则进行电泳后观察可出现长度为1.1kb和kb，或者分别是kb和kb两个片段．（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）．
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（1） 步骤①和②中常用的工具酶是。
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（2） 经过①和②步骤后，有些质粒上的基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。
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（3） 步骤③是的过程。为了促进该过程，应该用处理大肠杆菌。
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（4） 步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选。能在C中生长的大肠杆菌有种。
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（5） 步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”）上，请在图中相应的位置上圈出来。
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（1） 若要体外获得大量的人血清白蛋白基因，可采用PCR技术。该技术的前提是要根据一段已知目的基因的设计引物，而后经过变性、复性和三个步骤的循环对目的基因进行扩增。若该目的基因循环扩增4次，理论上需要消耗个引物。
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（2） 如果用山羊某个时期的反转录产生的多种双链cDNA片段与载体连接后储存在一个受体菌群中,这个受体菌群就叫做山羊的。
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（3） 在构建基因表达载体过程中，一般情况下质粒和目的基因需用进行切割。构建的重组质粒上的启动子是识别和结合的部位。
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（4） 将重组质粒通过法导入山羊的受体细胞时，常选用受精卵作为受体细胞的主要原因是。
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（5） 人的血清白蛋白基因能在山羊膀胱上皮细胞中表达的原因是。在转基因山羊体内人的血清白蛋白基因只在膀胱上皮细胞中表达的优点之一是。
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（1） 回答下列《生物技术实践》有关问题：
Ⅰ.高压蒸汽灭菌锅灭菌，开始加热时要打开排气阀、关闭安全阀，其目的是为了，以避免锅内达不到预设的温度或压力。
Ⅱ.葡萄酒呈现深红色的原因是。发酵完成后，将发酵液用过滤，除去葡萄皮和籽；酿果酒时，加蔗糖是为了。
Ⅲ.在制作泡菜测定亚硝酸盐含量时，显色剂是由10g/L的对氨基苯磺酸和1g/L的N-1-萘基乙二胺混合而成，泡菜打成匀浆前，（填不需要/需要）用清水冲洗；泡菜腌制过程中若泡菜坛有砂眼，常导致腌制的蔬菜臭而不酸，其原因可能是条件下乳酸菌不发酵，而其它杂菌繁殖后导致蔬菜腐败发臭。泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有等（写出两点）。
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（2） 药用植物是一类具有特殊用途的经济植物，对人类健康具有重要的医疗和保健作用。药用植物的品种改良工作引起了科研人员的重视。请回答下列问题：
Ⅰ.科研人员通过对植物的培养进行单倍体克隆。为鉴定单倍体植株，可通过制作临时装片观察来确定。
Ⅱ.人参皂甙具有抗肿瘤等作用，科研人员设计如图1所示流程制备人参皂甙Rg3，并研究过程③生物反应器中人参细胞产量、人参皂甙Rg3产量随培养时间的变化，结果如图2。
图1中的过程②常将愈伤组织进行悬浮培养得到X，X是，实现了能产生人参皂甙Rg3的细胞克隆及其工业化生产。由图2可知，影响人参皂甙Rg3产量的因素是。
Ⅲ.东莨菪碱是从东莨菪中分离出来的可用于麻醉镇痛、止咳、平喘。将莨菪中提取到天仙子胺6β羧化酶基因转入颠茄中，转基因颠茄能够产生大量的东莨菪碱。构建该目的基因的基因文库需要用到的工具酶是，然后用从该基因文库中选择、钓取。含目的基因的农杆菌侵染植物细胞时，加入农杆菌培养液中的植物组织往往切成许多小块，这种创伤刺激的意义是（写出两点）。
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（1） 对获取的目的基因可以通过 技术进行扩增。
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（2） 将目的基因导入植物细胞常采用的方法是 ，该方法的主要优点是其运载体上含有片段，可将目的基因插入到受体细胞染色体的 DNA 上。检测目的基因是否插入成功的方法 是，该方法应该用 作为探针。检测目的基因是否翻译成了相应蛋白质，利用的技 术是 。
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（3） 将导入目的基因的受体细胞培育成转基因植株涉及的细胞工程技术是，该技术的原 理是。
回答下列问题：
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（1） 图中步骤②构建重组质粒需要使用等工具酶。与直接将sRNA导入猪的心肌细胞相比，通过重组质粒将siRNA对应的DNA序列导入心肌细胞，其优点是（答出一点）。
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（2） siRNA对应DNA序列在心肌细胞中表达产生的si RNA，与RISC组装形成基因沉默复合物，通过抑制基因表达的过程，使Caspase 8基因沉默，从而降低IRI引起的细胞凋亡。
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（3） 研究人员根据Caspase 8基因的碱基序列，设计了三种序列分别导入猪的心肌细胞，通过测定靶基因Caspase 8的mRNA含量来确定最优序列。测定mRNA含量时，需提取心肌细胞的总RNA，经过过程得到cDNA，再进行PGR扩增，测定PCR产物量，结果如图所示。据此判断最优序列是。
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（4） 选用猪的心肌细胞做受体细胞是因为猪在基因、解剖结构、生理生化和免疫反应等方面与人类极为相似。为了解决心脏移植供体短缺问题，许多科学家正在研究用猪心脏代替人的心脏。你认为将猪心脏移植到人体面临的最大挑战是，请说出一种解决这一问题的思路：。
