第四章 生物化学与分子生物学技术实践 知识点题库

（1） 样品处理中红细胞的洗涤要用反复冲洗、离心．向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH 7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是 ．

（2） 血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是 ， 若要尽快达到理想的透析效果，可以（写出一种方法）．

（3） 血红蛋白的纯化是通过将相对分子质量大的杂质蛋白除去，

（4） 电泳利用了待分离样品中各种分子的等的差异，而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离．

（5） 一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳，观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如图所示．由图可知携带者有种血红蛋白，从分子遗传学的角度作出的解释是 ．

（1） 由于女性自然周期产生的卵子太少，捐献者在取卵前通常需要注射激素，促使一次有更多的卵泡发育．

（2） 过程③中防止多精入卵的屏障有和卵细胞膜反应．判断卵子受精的重要标志是．

（3） 上述“三亲婴儿”技术的好处之一是可避免母亲甲（填“细胞核”或“细胞质”）中的缺陷基因传给下一代．④过程为，⑤过程为技术，对移植前的胚胎采用ARY﹣PCR的方法进行性别鉴定时，宜取囊胚期的细胞．

（4） PCR技术可用于产前基因诊断，若某双链DNA分子扩增过程中消耗引物分子14个，则DNA扩增了次．

（1） 选取四倍体兰花叶片时，要选择的叶片作为外植体；外植体消毒过程中主要使用的两种消毒试剂是（标明浓度）．

（2） 植物激素中和是启动细胞分裂的关键性激素；①阶段产生更多生长素的前提下， （填激素名称）的作用呈现加强的趋势．

（3） 与正常细胞相比，愈伤组织细胞在结构上具有的特点，②过程的实质是．

（4） 实验室提取植物芳香油的方法有蒸馏、压榨和等．

（1） 植物芳香油的提取可采用的方法有压榨法、和．

（2） 芳香油溶解性的特点是不溶于，易溶于，因此可用作为提取剂来提取芳香油．

（3） 橘子果实含有芳香油，通常可用作为材料提取芳香油，而且提取时往往选用新鲜的材料，理由是．

（4） 对材料压榨后可得到糊状液体，为除去其中的固体物获得乳状液可采用的方法是．

（5） 得到的乳状液加入氯化钠并放置一段时间后，芳香油将分布于液体的层，原因是．加入氯化钠的作用是．

（6） 从乳状液中分离得到的芳香油中要加入无水硫酸钠，此试剂的作用是．

（1） 柚皮易焦煳，宜采用法提取柚皮精油，新鲜的柚皮干燥去水并用浸泡处理，该过程得到的糊状液体可通过过滤除去其中的固体杂质。

（2） 培养基中的尿素和牛肉膏可为乳酸菌A生长提供。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其相对分子质量越大，电泳速度。

（3） 做抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

（4） 柚皮油也可以用萃取法来提取，原因是，分析上图，提高萃取效果的方法是、。

（1） 利用萃取法对银杏叶中的黄酮类活性成分进行提取，在萃取之前需要对银杏叶进行粉碎和干燥处理，原因是。

（2） 通常可用对提取物进行纯度鉴定。

（3） 研究发现，95%乙醇提取物对黑曲霉、黄曲霉、杜青霉、草酸青霉和灰绿曲霉的生长有抑制作用。为了检测这些霉菌对提取物的敏感性，将菌种充分稀释后采用（接种方法）接种到平板上培养时一般（填“需要”或“不需要”）将平板倒置，请说明理由。

（1） 苹果醋是一种酸性发酵健身饮料，含有丰富的维生素、无机盐、氨基酸和有机酸类，风味独特，深受广大消费者欢迎。在苹果醋生产中，醋酸菌的性能对产品质量、发酵效率有很大影响。研究者为了从醋酸菌中选出优势高产的菌种，做了相关实验，部分实验结果如下所示。醋酸菌因产生醋酸溶解了培养基中的碳酸钙，而使菌落周围产生透明圈。回答下列问题：

菌株编号	透明圈直径（mm）	菌落直径（mm）
A1	3.5	1.5
A2	1.5	0.9
A3	7.2	1.8
A4	6.5	3.2

①菌株培养过程中需要对各种用具进行灭菌，置于超净台上的用具可利用灭菌30分钟。
②依据菌落的（答出2点）等特征筛选出四株可能是优势高产的菌株（A₁、A₂、A₃和A₄），并采用法来进一步纯化这些菌株。筛选的菌株接种于斜面培养基后，置于中临时保存。根据表中实验结果，可以选取菌株用于生产。
③用筛选出的高产醋酸菌制作苹果醋，当苹果酸和醋酸等总酸浓度不再增加时，其原因可能是。（答出2点）
④在苹果醋工业生产过程中，除考虑上述条件外，还需温度、pH和等外界因素。

（2） 如图为利用转基因小鼠获得人源性抗体的两种途径。回答下列问题：

⑤人体内抗体种类繁多，且抗体基因在细胞内一般成簇存在。获取人抗体基因可从细胞中提取出相应mRNA为模板，利用酶合成；或通过设计引物，利用技术获得。
⑥途径一利用胚胎干细胞作为受体细胞，原因是胚胎干细胞具有特点。为让抗体基因只在嵌合鼠乳汁中表达，可将抗体基因与小鼠乳清酸性蛋白基因的部位结合，构建出乳腺特异性表达载体。
⑦途径二将小鼠抗体基因剔除的目的是，获得的抗体比途径一的抗体具有优点。
 

（1） 图1中，Ori是（酶）首先结合的核苷酸序列。构建CRISPR-Cas9表达载体时使用的工具酶主要有。 结合对图2中CRISPR-Cas9技术原理的理解，图1表达载体中需要插入两种sgRNA基因，原因是。

（2） 研究中先将CRISPR-Cas9表达载体导入大肠杆菌DH5a，再将菌液利用法接种到加有的细菌培养基上，待菌落长成后，直接挑取菌落加入到PCR反应系统中进行基因鉴定。PCR过程中不需要先提取细菌DNA的原因是。

（3） 研究中采用培养转化的大肠杆菌对CRISPR-Cas9表达载体进行扩增。与PCR相比，利用大肠杆菌进行目的基因扩增的优点有、。

（4） 取转化的PK15细胞悬液进行有限稀释，再接种到6孔培莽板上，一段时间后对各孔内的细胞株进行DDX5蛋白检测，结果如图（其中B-actin是真核细胞骨架蛋白）。对细胞悬液有限稀释法的目的是， 细胞培养时CO₂培养箱中充入的气体应是。 根据检测结果，敲除DDX5基因的细

胞株编号有。