第2节微生物的纯培养知识点题库

请选出正确操作顺序（）
①吸取0.1ml菌液涂布 ②依次稀释不同倍数 ③ 土壤取样 ④称取10克土壤加入90ml无菌水的锥形瓶中

A . ③④②① B . ③④①② C . ④③②① D . ③①②④

乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下：

(1)筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是。从功能上讲，这种培养基属于。

(2)培养微生物L前，宜采用方法对接种环进行灭菌。

(3)纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量越 .

(4)乳糖酶宜采用化学结合法（共价键结合法）进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的确定其应用价值。除化学结合法外，酶的固定化方法还包括、、离子吸附法及交联法等。

微生物强化采油（MEOR）是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油粘度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术．以下是人们筛选、纯化和扩大培养该类微生物的实验操作．请回答下列问题：

（1）土壤是微生物的大本营，该类微生物应取自的土壤．

（2）为筛选和纯化该类微生物，从功能上分，应选用培养基，常用的接种方法是．

（3）接种后，应密封培养的原因是，培养一段时间后在培养基上形成降油圈，此时选取就可获得高效菌株．

（4）扩大培养过程中需要对微生物进行计数．取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220，则样品中微生物的数量为个/mL，该统计结果（低于、高于）实际值．

（5）在果醋制作时，运用醋酸菌在供应和糖源充足时，将糖分解成醋酸；在糖源不充足时，也可以利用酒精生成醋酸，请写出该过程的化学反应式：

（6）腐乳制作的流程是：让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制．用盐腌制时，应注意控制；配制卤汤时，要使卤汤中酒的含量控制在 %左右．

（7）制作泡菜的原理是．

将由啤酒酵母菌、乳链球菌、乳酸菌及黑曲霉、毛地霉等菌种组成的微生物复合制剂，添加到畜禽粪便（或食品加工废料）中，搅拌均匀，密闭后，在适宜的温度下放置7﹣10天，在此过程中不会发生（　　）

①无氧呼吸

②竞争

③ATPADP+Pi+能量

④ADP+Pi+能量ATP

⑤磷酸肌酸肌酸+磷酸+能量

⑥捕食

⑦出芽生殖

⑧分裂生殖

⑨孢子生殖

⑩光合作用．

A . ⑤⑥⑩ B . ③⑤⑥⑦⑩ C . ③⑥⑧⑩ D . ⑤⑥⑦⑩

（1）土壤是微生物的大本营，该类微生物应取自的土壤．
（2）为筛选和纯化该类微生物，如何配制培养基？．
（3）接种后需密封培养，由此推测该类微生物的代谢类型是，培养一段时间后在培养基上形成降油圈，此时选取就可获得高效菌株．

研究人员成功地从土壤中筛选到能产生纤维素酶的微生物．请就如何从土壤中获得纤维素分解菌回答以下问题：

（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即

（2）若获得纯净的菌株，常采用进行接种，此过程所用的接种工具是接种环，操作时采用灭菌的方法．

（3）刚果红可以与纤维素等多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的和葡萄糖发生这种反应．常用的刚果红染色法有两种：第一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；第二种是在时就加入刚果红．（填“第一种”或“第二种”）方法会使菌落之间发生混杂．

（4）如果观察到产生的菌落，说明可能获得了纤维素分解菌．为了确定是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验．

（5）如图为实验室培养和纯化菌种过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是

A．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行

B．步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灼烧处理

C．步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖

D．划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养．

回答有关微生物的问题

分析表1培养基配方，回答有关问题．

表1

成分	葡萄糖	KH₂PO₄	FeSO₄	NaCl	MgSO₄•7H₂O	琼脂	蒸馏水
含量	30g	1g	3g	3g	0.5g	15g	1L

（1）根据物理性质，该培养基属于培养基；根据用途划分，则属于培养基；根据培养基成分，所培养微生物的同化作用的类型是．
（2）不论何种培养基，配制完成后都要在121℃，1.05kg/cm²下保持15﹣30分钟，此操作的目的是．
（3）选用适合的培养基，制备成平板，分别用三个平板涂布接种三种细菌（E．coli、S．albus、B．subtilis），然后用镊子将三块沾有1万单位抗生素X、10万单位抗生素X和25万单位抗生素Y的圆纸片放在每个平板上，恒温培养．上述实验过程中需要灭菌的有_______（多选）．

A . 平板 B . 涂布工具 C . 圆纸片 D . 镊子
（4）经24小时培养后，测量圆纸片周围清晰区的宽度，数据如表2．
表2
细菌
抗生素（浓度）
X（1万单位）
X（10万单位）
Y（25万单位）
E．coli
7min
14min
18min
S．albus
32min
36min
17min
B．subtilis
8min
16min
26min
在控制S．albus感染时，选用哪种抗生素及浓度较为合理？．
（5）有病人感染B．subtilis而患病，选用25万单位抗生素X治疗该病人是不明智的做法，理由是_______ ．

A . 缺乏25万单位抗生素X的实验数据 B . 避免抗生素滥用 C . 10万单位抗生素X对 D . subtilis亦有作用 E . 25万单位抗生素X会对人体细胞造成损害

大肠杆菌是寄生于人和动物肠道中的细菌，其代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色．如表是其培养基配方：

成分	蛋白胨	乳糖	磷酸二氢钾	琼脂	蒸馏水	2%伊红水溶液	0.5%美蓝水溶液
含量	10g	10g	2g	20～30g	1000mL	20mL	13mL

回答下列问题：

（1）该培养基中，蛋白胨为大肠杆菌提供的主要营养有和维生素．从物理性质来看，该培养基属于培养基．
（2）对该培养基进行灭菌时，可采用法．在接种大肠杆菌前，需先将灭菌后的空白培养基放在恒温箱中培养一段时间，观察是否有菌落生成，其目的是．
（3）为检测严重污染水体中大肠杆菌数量，将水样适当稀释后，取样涂布在上述平板培养基中，应选择颜色为的菌落进行计数．该方法是通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数，其原理是．

下列关于微生物培养的叙述，不正确的是（）

A . 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵 B . 高温灭菌目的是杀死微生物的细胞、孢子、芽孢 C . 划线分离可在培养基上获得均匀分布的单菌落 D . 稀释涂布平板法易获得单菌落和计数活菌数目

图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。

（1）图中选择培养基应以为唯一氮源；鉴别培养基还需添作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成色。
（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较，原因是。
（3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码(终止密码有UAG、UGA和UAA)。突变基因转录的mRNA中，终止密码为，突变基因表达的蛋白质含个氨基酸。

下列有关培养基的叙述正确的是（）

A . 培养基中一定都需要添加碳源或氮源 B . 固体培养基中加少量水即可制成液体培养液 C . 水在培养基中只是作为溶剂，不是微生物的营养成分 D . 根据微生物对碳源需要的差异，可使用含不同碳源的培养基

下图依次表示倒平板、接种的位置，以及划线法接种等，其中不正确的是（）

A .

B .

C .

D .

下列选项中，不是使用选择培养基培养微生物的目的的是（）

A . 除去其他微生物 B . 使需要的微生物大量繁殖 C . 通过表现特殊性状，与其他微生物相区别 D . 可以增加要培养的微生物的浓度

某同学配制含琼脂的牛肉膏蛋白胨培养基后，对培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌，当培养基温度下降到50℃时，在酒精灯火焰附近倒平板，待培养基冷却至室温，按下表处理：

组别	处理
A组	打开培养皿盖，距地面0.3米处暴露15分钟
B组	打幵培养皿盖，距地面0.6米处暴露15分钟
C组	打开培养皿盖，距地面0.9米处暴露15分钟
D组	打开培养皿盖，距地面1.2米处暴露15分钟
E组	不打开培养皿盖

将处理完毕的培养皿置于适宜温度下培养2～3天，观察每个培养皿中的菌落特征和数目。回答下列问题：

（1）上述实验的实验目的是。若E组的培养基表面有菌落生长，说明了。
（2）培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为微生物生长提供和。“在酒精灯火焰附近”进行相关操作是为了。
（3）实验过程特别强调温度控制，请简要说明下列温控措施的目的：
①“待培养基冷却至室温”的目的有。
②“将处理完毕的培养皿置于适宜温度下培养”的目的是。
（4）培养微生物时将培养皿倒置的目的是。实验结束后，对使用过的培养基应进行处理。

为了筛选能产生阿拉伯胶（—种多糖）降解酶的菌株SM01，应选用表中培养基（）

培养基	阿拉伯胶	阿拉伯胶酶	NaNO₃	牛肉膏	K₂HPO₄	MgS0₄	KC1	FeS0₄
A	25g/L	-	-	3g/L	lg/L	lg/L	0.5g/L	O.Olg/L
B	25g/L	lμg/L	-	-	lg/L	lg/L	0.5g/L	O.Olg/L
C	-	-	3g/L	3g/L	lg/L	lg/L	0.5g/L	O.Olg/L
D	25g/L	-	3g/L	-	lg/L	lg/L	0.5g/L	O.Olg/L

A . A B . B C . C D . D

禾草灵（FE）是一种现代农业常用除草剂，大量使用后造成的环境污染日益严重，为获得能高效降解FE的菌株，科学家通过实验获得W1菌株并利用紫外分光光度计检测其对FE的降解效果（FE特征吸收峰在239nm处），以下说法不正确的是（　　）

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A . 应从大量使用除草剂的土壤中获取菌株 B . 将土壤稀释液灭菌后接种到选择性培养基上 C . 应使用以FE作为唯一碳源的培养基进行筛选 D . 据吸收光谱可知，W1菌株对FE有明显降解能力

下列有关微生物营养的说法正确的是（）

A . 纤维素分解菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的 B . 实验室培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素 C . 培养基中的营养物质浓度越高对微生物的生长越有利 D . 任何培养基都必须含有碳源、氮源、无机盐、水和琼脂

盛夏烈日炎炎，紫外线强烈，大气臭氧层可吸收紫外线，保护地球上生物。那么，紫外线伤害生命的生物学原理主要是（）

A . 基因突变 B . 染色体变异 C . 消毒、杀菌 D . 蛋白质癌变

测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。滤膜法的大致流程如下图1所示：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到含有伊红美蓝的培养基(EMB培养基)上培养→统计菌落数目。培养基中的指示剂伊红美蓝可使大肠杆菌菌落呈现紫黑色。请回答下列问题：

（1）从培养基的功能看，EMB培养基属于培养基。过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中需要进行灭菌处理的是，与过滤有关的操作都要在旁进行。
（2）图1中，将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，可将滤膜上的菌体“复印”在培养基上，这个步骤属于微生物培养中的操作。培养时，平板的放置应如图2中所示。
（3）某生物兴趣小组的同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10 mL待测水样加入到90 mL无菌水中，稀释后的菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为124，紫黑色菌落数平均为31，则推测1 L待测水样中的大肠杆菌数目为。
（4）将大肠杆菌进行扩大培养时，用摇床振荡培养的目的是。
（5）不同微生物培养的温度和时间往往不同，在培养箱中培养时，细菌培养温度（填“高于”“低于”或“等于”）霉菌培养温度，培养时间则（填“长于”或“短于”）霉菌培养时间。

大肠杆菌是异养兼性厌氧型微生物，广泛分布在自然界中，在特定条件下能够引起人体或动物胃肠道感染，大肠杆菌是衡量饮用水是否安全的检测项目之一、回答下列问题：

（1）实验室培养大肠杆菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，该培养基中牛肉膏的作用是，倒好培养基的平板需要倒过来放置，原因是。
（2）严格进行无菌操作是大肠杆菌培养与检测的关键，对接种环等常用灭菌法进行灭菌，培养基及多种器材用灭菌法灭菌。
（3）实验室常用法对待测样品中的大肠杆菌进行接种和计数，大肠杆菌的代谢产物能与反应，使菌落呈现黑色，据此可鉴别大肠杆菌菌落。
（4）对于经常使用的菌种可采用接种临时保存，该保存方法的优点是操作简单、使用方便，不足之处是。

细菌	抗生素（浓度）
细菌	X（1万单位）	X（10万单位）	Y（25万单位）
E．coli	7min	14min	18min
S．albus	32min	36min	17min
B．subtilis	8min	16min	26min

第2节 微生物的纯培养 知识点题库

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