DNA的粗提取和鉴定 知识点
（一）实验原理：
1、DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精。
2、提纯原理
（1）DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。
（2）酶的专一性——蛋白酶水解蛋白质，但对DNA没有影响。
（3）蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60-80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。
(4)洗涤剂：能瓦解细胞膜，对DNA无影响。
3、鉴定原理：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色。
（二）操作流程：
①材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织。
②破碎细胞(以鸡血为例)：
。
③去除杂质：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质。
④DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精溶液。
⑤DNA的鉴定：在溶有DNA的溶液中加入二苯胺试剂，混合均匀后将试管置于沸水中加热5min，溶液变成蓝色。
（三）注意事项：
1.以血液为实验材料时，需在血液中加入柠檬酸钠防止凝固。
2.用洗涤剂处理植物细胞时动作要轻缓，防止产生大量泡沫。加入酒精后用玻璃杯搅拌动作要轻缓，防止DNA分子断裂，不能形成絮状沉淀。3.鉴定DNA用的二苯胺试剂要现配现用，否则影响实验效果。
1、DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精。
2、提纯原理
（1）DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。
（2）酶的专一性——蛋白酶水解蛋白质，但对DNA没有影响。
（3）蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60-80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。
(4)洗涤剂：能瓦解细胞膜，对DNA无影响。
3、鉴定原理：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色。
（二）操作流程：
①材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织。
②破碎细胞(以鸡血为例)：
。③去除杂质：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质。
④DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精溶液。
⑤DNA的鉴定：在溶有DNA的溶液中加入二苯胺试剂，混合均匀后将试管置于沸水中加热5min，溶液变成蓝色。
（三）注意事项：
1.以血液为实验材料时，需在血液中加入柠檬酸钠防止凝固。
2.用洗涤剂处理植物细胞时动作要轻缓，防止产生大量泡沫。加入酒精后用玻璃杯搅拌动作要轻缓，防止DNA分子断裂，不能形成絮状沉淀。3.鉴定DNA用的二苯胺试剂要现配现用，否则影响实验效果。
DNA的粗提取和鉴定 知识点题库
DNA不溶解于( )
A . 氯化钠溶液
B . 氯化钾溶液
C . 酒精溶液
D . 氯化镁溶液
下列关于实验选材的相关叙述，不正确的是（ ）
A . 从腐殖土中筛选分解纤维素的细菌
B . 菊花组织培养选择生长旺盛的嫩枝
C . 选择干燥后的胡萝卜提取胡萝卜素
D . 选择噬菌体衍生物提取DNA
下列有关实验变量的叙述，正确的是（ ）
A . 探究温度对酶活性影响，酶催化的反应速率是自变量
B . 模拟探究细胞大小与物质运输关系，正方体琼脂块的体积是无关变量
C . 探究植物生长调节剂对扦插枝条生根作用，插条生根数是因变量
D . 探究光照强弱对光合作用强度影响，小圆形叶片表面的气泡数是因变量
下列关于实验现象与结果的分析,错误的是（ ）
A . 组织切片上滴加苏丹Ⅲ染液,显微观察有橘黄色颗粒说明有脂肪
B . 组织样液中滴加斐林试剂,不产生砖红色沉淀说明没有还原糖
C . 洋葱表皮细胞滴加蔗糖溶液后,发生质壁分离说明细胞有活性
D . PCR 产物中加入二苯胺试剂,加热变蓝说明有目的 DNA 产生
在下图中能反映DNA溶解度与NaCl溶液浓度之间关系的是 ( )
A . 
B . 
C . 
D . 
B .
C .
D .
“DNA的粗提取与鉴定”实验中，操作正确的是( )
A . 取制备好的鸡血细胞液5～10 mL，注入烧杯中，迅速加入物质的量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液20 mL，同时用玻璃棒沿同一方向快速搅拌5 min，可使血细胞破裂，释放出DNA
B . 整个DNA提取过程中，两次加蒸馏水的目的，都是为了降低溶液中NaCl的浓度，使DNA分子的溶解度达到最低，析出DNA分子
C . 整个DNA提取操作中，两次加入2 mol/L的NaCl溶液，目的都是使DNA尽可能多地溶解在NaCl溶液中
D . DNA鉴定操作中，只要向溶有DNA的NaCl溶液中加入4 mL的二苯胺试剂，即可出现蓝色
某生物兴趣小组在学习了DNA的粗提取和鉴定实验后，尝试开展RNA的粗提取和鉴定实验。通过查阅资料，制订了以下的实验方案：
【实验课题】酵母RNA的提取和鉴定
【实验目的】1．从酵母中提取RNA；2．鉴定RNA。
【实验原理】微生物是工业上大量生产RNA的原料，其中以酵母尤为理想，因为酵母核酸中主要是RNA，DNA很少，菌体易收集，RNA易分离。RNA不溶于乙醇和无水乙醚。利用稀碱法（稀碱能使细胞壁溶解）或高盐法（高浓度的盐改变细胞膜的通透性）来释放RNA。RNA水解液（加硫酸、加热）+苔黑酚-FeCl3试剂加热直到沸腾1分钟，会呈现墨绿色。
【实验材料】干酵母粉、离心机、烧杯、试管、玻璃棒等；0.2%氢氧化钠、95%乙醇、无水乙醚、乙酸、10%硫酸溶液、苔黑酚-FeCl3试剂等。
【实验步骤】
①称6克干酵母
②加0.2%氢氧化钠45mL，沸水加热20分钟，搅拌，后加乙酸7滴
③离心10分钟后取上清液
④边搅拌边缓慢加95%乙醇并静置10分钟
⑤离心后先用95%乙醇洗两次，再用无水乙醚洗两次
⑥获得RNA粗制品
⑦RNA鉴定
请根据实验方案，思考并回答下列问题：
-
（1） 酵母菌细胞中含有RNA的结构有。酵母菌也是便于用来研究细胞呼吸不同方式的好材料，理由是。
-
（2） 实验步骤⑤中，离心后取用乙醇、无水乙醚进行洗涤。
-
（3） RNA提取过程要注意温度的控制，在20～70℃的温度范围内停留的时间不能太长，其原因是。
-
（4） 稀碱法提取RNA须在沸水浴中进行的目的，一是，二是，以便获得更多更纯净的RNA。
-
（5） 若用花椰菜来提取DNA，可用瓦解细胞膜，然后充分研磨，实验中研磨速度要。
请回答下列有关细胞和分子生物学技术的问题：
-
（1） DNA粗提取的实验原理是：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在mol/L的NaCl溶液中的最低；鉴定DNA所用的试剂是，沸水浴加热呈色；实验中使用酒精的目的是；实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟的鸡血红细胞涨破释放出DNA，第二次目的是。
-
（2） PCR技术的中文全称是，在操作过程中需要添加引物，它的化学本质是。反应过程中控制不同温度的意义是不同的： 90℃以上时，双链DNA解聚为单链；50℃左右时，引物与两条单链DNA结合； 72℃左右时延伸，Taq DNA聚合酶有最大活性，使DNA新链沿着方向延伸。
DNA的粗提取中，加入与滤液体积相等的、冷却的A溶液，静置2min～3min，溶液中会出现白色丝状物．上面的A溶液是指（ ）
A . 0.9%的NaCl溶液
B . 0.14 mol/L的NaCl溶液
C . 质量分数15%的HCl
D . 体积分数为95%的酒精溶液
下列叙述中错误的是（ ）
A . 改变NaCl溶液的浓度只能使DNA溶解而不能使其析出
B . 在沸水浴中，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色
C . 用电泳法可分离带点性质、分子大小和形状不同的蛋白质
D . 用透析法可去除蛋白质样品中的小分子物质
如果使用紫外分光光度计对蛋白质和核酸进行定性或定量分析，需要将波长调到（ ）
A . 蛋白质是260nm，核酸是280nm
B . 蛋白质是280nm，核酸是260nm
C . 都是260nm
D . 都是280nm
下表有关“DNA的粗提取和鉴定”的相关操作中所选取的试剂，不正确的是（ ）
相关操作 | 选取的试剂 | |
A | 破碎鸡血细胞 | 蒸馏水 |
B | 溶解核内DNA | 2mol/L NaCl溶液 |
C | 提取杂质较少的DNA | 冷却的95%的酒精 |
D | DNA的鉴定 | 双缩脲试剂 |
A . A
B . B
C . C
D . D
下列关于“DNA的粗提取”实验的叙述中，正确的是（ ）
A . 常温下香蕉匀浆中有些酶会影响DNA的提取
B . 洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度
C . 向鸡血细胞悬液中加入蒸馏水后，用玻璃棒轻轻缓慢搅拌
D . 使用鸡血细胞悬液为材料的操作中，两次加入2 mol/L的NaCl溶液，目的不同
下列关于生物技术实践的叙述，错误的是（ ）
A . 固定化酵母细胞过程中，用注射器滴加溶液时要接近CaCl2液面，防止凝胶珠出现“尾巴”
B . 用加酶洗衣粉洗涤污渍时，浸泡时间与洗涤效果没有关系
C . 向DNA溶液中加入二苯胺试剂即可出现蓝色
D . 腐乳制作过程中，添加料酒、香辛料和盐，均可以抑制杂菌的生长
下列有关DNA粗提取和鉴定实验的叙述正确的是（ ）
①利用鸡血细胞在低渗溶液中涨破的原理制备含DNA的滤液
②利用在不同浓度的NaCl溶液中溶解度差别粗提取和纯化DNA
③利用DNA不溶于乙醇的性质进一步纯化DNA
④利用DNA与二苯胺溶液显色反应对样本中的DNA进行鉴定
A . ①②③
B . ①③④
C . ②③④
D . ①②③④
根据下列实验操作及结果得出的结论中，正确的是（ ）
| 编号 | 实验操作及结果 | 结论 |
| ① | 用光学显微镜直接观察人口腔上皮细胞时，未观察到线粒体 | 人口腔上皮细胞不含线粒体 |
| ② | 一定浓度的过氧化氢溶液在90℃水浴加热下，产生气泡的速率大于常温下 | 加热可加快过氧化氢的分解 |
| ③ | 某生物组织样液中加入斐林试剂后直接观察，未产生砖红色沉淀 | 该生物组织不含还原糖 |
| ④ | 利用PCR技术扩增某目的基因，扩增产物中加入二苯胺试剂后加热变蓝 | 扩增产物含有该目的基因 |
A . ①
B . ②
C . ③
D . ④
某同学用鸡血进行DNA粗提取和鉴定实验。下列有关叙述正确的是（ ）
A . 可用兔血代替鸡血进行实验
B . 含有DNA的滤液中加入2mol/L的NaCl溶液，再过滤去除溶解的杂质
C . 实验前需要预先配制好2mol/L和0.14mol/L两种NaCl溶液
D . 鉴定时，两支试管中都应加入等量的NaCl溶液和二苯胺试剂
下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）
A . 羊的成熟红细胞可作为提取DNA的材料
B . 提取植物细胞的DNA时，需要加入一定量的洗涤剂和食盐
C . 预冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解
D . 在沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色
粗提取 DNA 时，向鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水并搅拌，过滤后所得滤液进行下列处理后再进行过滤，在得到的滤液中加入特定试剂后容易提取出 DNA相对含量较高的白色丝状物的处理方式是（ ）
A . 加入适量的木瓜蛋白酶
B . 37～40℃的水浴箱中保温 10～15 分钟
C . 加入与滤液体积相等的、体积分数为 95%的冷却的酒精
D . 加入 NaCl 调节浓度至 2mol/L→过滤→调节滤液中 NaCl 浓度至 0.14mol/L
下列说法错误的是（ ）
A . DNA的粗提取是利用不同物质在理化性质方面的差异进行提取的，如DNA不溶于酒精，蛋白质溶于酒精
B . DNA遇二苯胺试剂水浴加热后呈现蓝色
C . PCR中引物的作用是使DNA连接酶从引物的3端开始连接脱氧核苷酸
D . 电泳的原理是在电场的作用下，带电的DNA分子会向着与它所带电荷相反的方向的电极移动
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