基因工程的基本工具（详细） 知识点
（2）“分子缝合针”——DNA连接酶
（3）“分子运输车”——载体
基因工程的基本工具（详细） 知识点题库
（1）基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性．利用基因工程等技术培育转基因生物时，基因工程的四步骤如下：
第一步：目的基因的获取．获取方法有 （写出两种即可）．
第二步：基因表达载体的构建．该步骤常用的工具酶是 ．完整的重组载体应具备 种特殊DNA片段．
第三步：将目的基因导人受体细胞．如受体细胞为动物的 ，则常用的方法是显微注射法；如受体细胞为微生物细胞，则用 处理细胞，使其处于感受态，然后在一定温度下重组表达载体与缓冲液混合完成转化．
第四步： ．
（2）胚胎工程主要是对哺乳动物的胚胎进行某种人为的工程技术操作，然后让它继续发育，获得人们所需要的成体动物的新技术．
①体外受精：对精于进行获能处理的方法有 ．获能的精于与成熟的卵子需在 中完成受精作用．
②早起胚胎的发育：受精卵不断增殖的过程，细胞分化最先出现在 期．
③胚胎移植：适合移植的胚胎是 ．
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生 末端．若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生 （相同，不同）粘性末端的限制酶．
（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是 ．在用表达载体转化大肠杆菌时，常用 处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为 ．为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成 ，常用抗原﹣抗体杂交技术．
如果要将某目的基因通过农杆菌传话法导入植物细胞，先要将目睹基因插入农杆菌Ti质粒的 中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的 上．
在图所示的质粒PZHZ11（总长为3.6kb，1kb=1000对碱基因）中，lacZ基因编码β﹣半乳糖苷酶，后者催化生成的化合物能将变色的大肠杆菌染成蓝色．
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（1） 若先用限制酶BamHⅠ切开pZHZ11，然后灭活BamHI酶，再加DNA连接酶进行连接，最后将连接物导入足够数量的大肠杆菌细胞中，则含3.1kb质粒的细胞颜色为；含3.6kb质粒的细胞颜色为．
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（2） 若将两段分别用限制酶BamHI和BglHI切开的单个目的基因片段置换pZHZ11中0.5kb的BamHI酶切片段，形成4.9kb的重组质粒，则目的基因长度为kb．
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（3） 上述4.9kb的重组质粒有两种形式，若用BamHI和EcoRI联合酶切其中一种，只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段；那么联合酶切同等长度的另一种重组质粒，则可获得kb和kb两种DNA片段．
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（4） 若将人的染色体DNA片段先导入大肠杆菌细胞中克隆并坚定目的基因，然后再将获得的目的基因转入植物细胞中表达，最后将产物的药物单独注入小鼠体内观察其生物功能是否发挥，那么上述过程属于 ．A . 人类基因工程 B . 动物基因工程 C . 植物基因工程 D . 微生物基因工程．
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（1） 步骤①和②中常用的工具酶是。
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（2） 经过①和②步骤后，有些质粒上的基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。
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（3） 步骤③是的过程。为了促进该过程，应该用处理大肠杆菌。
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（4） 步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选。能在C中生长的大肠杆菌有种。
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（5） 步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”）上，请在图中相应的位置上圈出来。
B . 
C . 
D . 
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（1） 剪除Ti质粒的某些片段、替换复制原点O与添加抗生素的抗性基因T的过程①中，需用多种限制酶处理，原因是，需用（填“E.coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）“缝合”双链DNA片段的平末端。
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（2） 目的基因是指和一些具调控作用的因子。由过程②形成的基因表达载体中，目的基因的首端具有识别和结合的部位。
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（3） 过程③常用处理使农杆菌成为感受态细胞。抗生素抗性基因T的作用是。
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（4） 过程④获取原生质体的过程中，应用处理植物细胞。
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（5） 在过程⑤⑥前，常采用技术检测农杆菌和愈伤组织细胞中是否含有目的基因。
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（1） 利用PCR技术从cDNA文库中获取目的基因（基因序列未知），需根据相应蛋白质的氨基酸序列设计多种引物，原因是，基因表达载体中目的基因上游的是RNA聚合酶的识别位点。
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（2） 将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是。
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（3） 下图是利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将目的基因导入植物受体细胞的示意图。图中质粒含CRISPR基因和Cas9基因，CRISPR基因转录的sgRNA可以特异性识别细胞核DNA分子中的特定序列，Cas9基因表达的Cas9酶能切割被sgRNA识别的DNA序列。重组片段中的目的基因，能通过DNA损伤修复和被切割的DNA序列连接。
sgRNA通过特异性识别细胞核DNA分子中的有关序列，sgRNA，Cas9酶和基因工程中的基本工具作用相似。不同基因工程中利用的CRISPR/Cas9质粒有差异，这些质粒中所含的CRISPR基因通常是（填“相同”或“不同”）的，所含的Cas9基因通常是（填“相同”或“不同”）的。
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（4） 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将目的基因导入受体细胞与“（2）”中使用的方法相比，优点是。
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（1） 研发DNA疫苗时，构建含有病原体抗原基因表达载体的过程中需要用到的工具酶有。
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（2） 图中所用的载体是，构建基因表达载体的目的是，基因表达载体中，驱动病原体抗原基因转录的结构为。将该DNA疫苗导入受体细胞的方法是肌肉注射法或。
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（3） mRNA疫苗可以由计算机设计、制造并通过高速机器大批量生产。目前用于制造疫苗的RNA有两种，非复制型mRNA和自我扩增型mRNA，从图中可以看出自我扩增型mRNA的优点是可在细胞内。mRNA常被包裹在脂质体颗粒中注射到相关人员的手臂肌肉，脂质体颗粒的作用是。
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（4） 病毒核酸检测试剂盒通常以病毒独特的基因序列为检测靶标。PCR扩增时每一个循环分为三步，使靶标DNA序列呈指数增加。每一个扩增出来的DNA序列都与预先加入的一段荧光标记结合，产生荧光信号，扩增出来的靶标DNA序列越多，累积的荧光信号就越强。在没有病毒的样本中，因为没有靶标DNA序列扩增，所以就检测不到荧光信号增强。
①通常用一种限制性酶处理含目的基因的DNA，用另一种处理载体DNA
②目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变
③目的基因与载体结合的过程发生在细胞外
④常使用的载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等
⑤基因工程经常以抗生素抗性基因为目的基因
⑥细菌质粒是基因工程常用的载体
