第一章 发酵工程 知识点题库

（1） 在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是（    ）（多选）

（2） 在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是 ．

（3） 刚果红（CR溶液）可以与纤维素形成红色复合物，不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应．表是两种培养基的配方，“+”表示有，“﹣”表示无．

	酵母膏	无机盐	淀粉	纤维素粉	琼脂	CR溶液	水
培养基甲	+	+	+	+	﹣	+	+
培养基乙	+	+	+	﹣	+	+	+

据表判断，培养基甲能否用于分离和鉴别纤维素分解菌？回答并说明理由；培养基乙能否用于分离和鉴别纤维素分解菌？回答并说明理由 ．

（4） 研究人员在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落（如图1）．图中降解圈大小与纤维素酶的有关．图中降解纤维素能力最强的菌株是 ．

（5） 研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株A和B，在不同温度和pH条件下进行发酵测得发酵液中酶活性（U•g^﹣1protein）的结果如图2，推测菌株更适合用于人工瘤胃发酵，理由是 ．

（1） 永州泡菜鲜美可口，而且开胃、增加食欲，泡菜开胃增加食欲的原因是泡菜中含有促进开胃增加食欲的物质是．

（2） 取泡菜的汤汁制作临时装片在显微镜下观察，制作泡菜选用的菌种是如图的（  ）所示的生物．

（3） 尽管泡菜鲜美可口但不能多吃，还是多吃新鲜的蔬菜为佳，因为新鲜蔬菜的亚硝酸盐含量比泡菜．

（4） 测定亚硝酸盐含量实验过程中，在泡菜提取的滤液中加入氢氧化铝的作用是．

（5） 用稀释涂布平板法测定每克泡菜原汁的乳酸菌的含量，泡菜原汁取样于同一时间同一坛泡菜，分别在10³、10⁵、10⁷三种稀释倍数下，各种稀释倍数下均涂布了四个平板，每个平板均接种0.1mL稀释菌液，在无氧、适温条件下培养的实验结果如表：

稀释103倍				稀释105倍				稀释107倍
平板（A）中的菌落数				平板（B）中的菌落数				平板（C）中的菌落数
A1	A2	A2	A4	B1	B2	B3	B4	C1	C2	C3	C4
341	303	283	350	308	245	251	284	21	33	39	19

根据上表数据计算，每克泡菜原汁中乳酸菌数目大约为个．

（6） 最近湘雅医院抢救了一例亚硝酸盐中毒患者，据苏教授说亚硝酸盐具有强氧化性，可将正常的二价铁氧化成三价铁，使患者的变性失活，出现缺氧症状．

（7） 在人体消化道的微生物作用下，亚硝酸盐可转化成具有致癌作用的．

（1） 金黄色葡萄球菌的培养基为7.5％NaCl牛肉膏蛋白胨培养基，此培养基能为金黄色葡萄球菌的生长提供碳源、氮源及水和无机盐。培养基中加入7.5％NaCl利于金黄色葡萄球菌的筛选，原因是。

（2） 上述培养基的灭菌方法是。在制作血平板时需等平板冷却后，方可加入血液，以防止。血平板在使用前，需置于恒温培养箱中一段时间的目的是。

（3） 取10mL自来水样，加入mL无菌水稀释成10^-1稀释自来水样，依次操作，制作10^-2、10^-3、10^-4稀释自来水样。

（4） 将0.1 mL 10^-l～10^-4的四个稀释样液，分别接种到4组(每组3个)血平板上的方法是。在血平板上，金黄色葡萄球菌菌落的周围会出现。若在10^-3组的3个血平板上，金黄色葡萄球菌菌落数分别为39、38和37，则每升自来水中的活菌数约为。

（1） 在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是。若培养基需要调节pH，则应在灭菌之（填“前”或“后”）调节。

（2） 为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在土壤中取样，并在培养基上添加适量的进行选择培养。

（3） 该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是。

（4） 若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用直接计数，也可选用法统计活菌数目。

（5） 将获得的3种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在1L含20mg有机磷农药的相同培养液中培养（培养液中其他营养物质充裕、条件适宜），观察从实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为32小时、45小时、16小时，则应选择微生物（填“甲”、“乙”或“丙”）作为菌种进行后续培养。

（1） 为获得高产亚硝酸盐还原酶的乳酸菌，某研究组以东北传统自然发酵酸菜为材料进行分离。

①在进行乳酸菌分离纯化时，科研人员将酸菜发酵液稀释后涂布在含溴甲酚绿（遇酸变色）的（“选择”或“鉴别”）培养基上，（“需氧”或“厌氧”）培养一段时间后，挑取周围变色的临时保存。

②在进行高产亚硝酸盐还原酶菌株筛选时，将临时保存的各菌种分别接种到含的液体培养基中培养一段时间，离心收集上清液，在酸化条件下，依次加入等量对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐进行反应，筛选反应显色较（填“深” 或“ 浅”）的组对应的菌株。

（2） 利用筛选得到高产烟硝酸盐还原酶的某菌种进行酸菜腌制，测定亚硝酸盐含量（单位：mg/kg），结果如下表所示：

据表分析，亚硝酸盐含量最高时的腌制条件是。为避免细菌大量繁殖，产生大量的亚硝酸盐，除控制好表中涉及的腌制条件外，还需控制好腌制的。

（1） 胡萝卜可生吃，可炖煮，还可以制作成泡菜，泡菜发酵过程中会产生亚硝酸盐，因此食用前需要检测泡菜中亚硝酸盐的含量而避免中毒，测定亚硝酸盐含量的常用方法是。制作泡菜时，若泡菜坛未密封好，则会因杂菌污染而导致制作失败，为探明导致泡菜制作失败的微生物种类，实验小组将被污染的泡菜液接种到培养基上进行培养。常用于统计活菌数目的接种方法是，使用该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目偏低，原因是。统计微生物数目的方法除利用菌落进行活菌计数外，还有法。

（2） 胡萝卜中含有大量的胡萝卜素，天然胡萝卜素具有使癌细胞恢复成正常细胞的功能，根据胡萝卜素具有易溶于有机溶剂的特点，常采用法提取胡萝卜素。

（3） 芫荽，又名香菜，也是伞形科的一种常见食材，香菜之所以具有香气，是因为其含有挥发性精油，精油在日常生活中有着广泛的应用，不同精油的制备过程不同，这与其原料的性质等有关，柚皮在水中蒸馏时容易焦糊，宜采用法提取柚皮精油；玫瑰精油的化学性质稳定，难溶于水，常选择    法进行提取。

（1） 筛选分离出耐高温（42℃）的反硝化细菌所用的BTB培养基以为唯一氮源，对该培养基可以使用法进行灭菌。

（2） 待平板凝固后，应倒置放在超净台上，目的是。图中①②步骤将污泥样品接种到BTB培养基上使用的方法是。

（3） 接种好的培养基应该放在的环境中培养2~3天，然后挑选显色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。

（4） 若将获得的纯反硝化细菌菌株进行临时保藏，其操作及保藏的具体方法是。

（1） （一）研究人员欲从土壤中筛选高淀粉酶活性的目标菌研究。回答下列问题：
为筛选胞外淀粉酶分泌型菌种，一般从（A．果园树下   B．肉类加工厂周围   C．米酒厂周围   D．枯树周围）获得土样，用无菌水稀释，接种至以为唯一碳源的固体培养基上进行培养，另外，该培养基还应含有氮源、水、无机盐、生长因子和。

（2） 微生物菌种纯化时，为得到单菌落，最常用的两种接种方法是和。从土壤中筛选目标菌时，加碘液染色后，平板上出现了A、B两种菌落（如下图所示）。如果要得到淀粉酶活力较高的菌株，应该选择（填“A”或“B”）菌落进一步纯化。

（3） 如果上图所示的平板培养基上除了上述A、B菌落外，还明显存在着另外一个菌落，但菌落周围并没有出现透明圈，据上述培养条件推测形成该菌落的微生物应属于生物。

（4） （二）枯草芽孢杆菌可分泌纤维素酶。研究者筛选到一株降解纤维素能力较强的枯草芽孢杆菌菌株（B菌），从中克隆得到了一种纤维素酶（C₁酶）基因。将获得的C₁酶基因与高效表达载体（HT质粒）连接，再导入B菌，以期获得降解纤维素能力更强的工程菌。
对克隆到的C₁酶基因测序，与数据库中的C₁酶基因编码序列相比有两个碱基对不同，但两者编码出的蛋白的氨基酸序列相同，这是因为。

（5） C₁酶基因以B链为转录模板链，转录时mRNA自身的延伸方向为。为了使C₁酶基因按照正确的方向与己被酶切的HT质粒连接，克隆C₁酶基因时在其两端添加了SmaⅠ和BamHⅠ的酶切位点。该基因内部没有这两种酶切位点。图1中酶切位点1和2所对应的酶分别是。酶切后的C₁酶基因需要在酶的作用下与HT质粒连接构建基因表达载体。一个基因表达载体的组成必须有启动子、终止子、复制原点、、等。

（6） 转化形成工程菌的过程中，应先用处理枯草芽孢杆菌，使其处于容易吸收周围DNA的状态。

（7） 将纤维素含量为20%的培养基分为三组，一组接种工程菌，对照组1不进行处理，对照组2进行相应处理。在相同条件下培养96小时，检测培养基中纤维素的含量。图2结果说明工程菌降解纤维素的能力最强，推测对照组2的处理应为。

（8） 预期该工程菌在处理废弃物以保护环境方面可能的应用。（举一例）