果胶酶的活性测定 知识点题库

（1） 若要分离产果胶酶菌株，需配制以为唯一碳源的培养基，该培养基能分离目的菌株的原因是。

（2） 将从果园采集的土壤放入适量的无菌水中，振荡混匀制成土壤悬液，备用。

①为获得均匀分布的单菌落，先将土壤悬液进行处理，然后将处理后的土壤悬液接种于（物理状态）培养基上。该方法也可用于测定产果胶酶菌的数量，但测定的菌体数量通常比实际值。

②若增加对照组可提高实验结果的可靠性，对照组的设置为。

（3） 为探究不同温度对果胶酶活性的影响，某兴趣小组进行了如下实验：

实验步骤

①在甲、乙两支试管中分别加入5mL山楂泥､2mL果胶酶，并置于10℃恒温水浴锅中保温5分钟；

②将步骤①处理后的果胶酶倒入山楂泥中，混匀后10℃保温20分钟；

③过滤混合物，收集滤液，测定果汁量；

④将实验温度分别设置为20℃､30℃､40℃､50℃､60℃､70℃､80℃的条件下，重复实验步骤①②③，并测定、记录果汁量。

实验结果：（略）

上述实验步骤①②中先分别保温、再混合的目的是，该实验通过来判断果胶酶活性的大小。

（1） 胡萝卜素可用于治疗因缺乏维生素A引起的夜盲症，原因是。

（2） 打浆后可用固定化果胶酶处理果汁提高澄清度，原因是；与直接使用酶相比，固定化酶的优点有（答出1点即可），固定化酶技术常用的方法有。

（3） 技术人员研究了不同方法进行去皮和热处理对胡萝卜素含量的影响，结果如下表。

处理方法	去皮方法			热处理方法
	碱液去皮	热水去皮	复合磷酸盐去皮	热水	柠檬酸预煮	醋酸预煮	抗坏血酸预煮
胡萝卜素保存率（%）	84.8	86.9	93.9	89.5	89.4	92.7	93.3

①为测定胡萝卜素的含量，先采用法提取胡萝卜素，较适宜用来提取胡萝卜素的溶剂是（填“乙醇”或“石油醚”），不选择另一种溶剂的理由是。

②据实验结果，制作胡萝卜汁过程中较宜选用的去皮和热处理方法分别是。

（1） 回答与桑椹汁、桑椹酒和桑椹醋生产有关的问题：

①桑椹汁生产：挑选新鲜桑椹制匀浆，匀浆中用果胶酶将果胶彻底酶解得到，目的是提高果汁的。

②桑椹酒生产：桑椹汁中加入由、发酵红曲、乳酸链球菌素构成的复合发酵工艺组合，能快速启动发酵，并能有效抑制发酵过程中污染而导致挥发酸超标；在16.6℃下发酵26天，可获得酒精度为4%的桑椹酒；欲加快发酵过程，可以采取的措施有（至少答出2点）。

③桑椹醋生产：选择高产醋杆菌时，可将醋杆菌用法培养在白色的CaCO₃培养基上，并挑选的菌落作为发酵菌种。若增加接种量和接种不同类型醋杆菌，则可以加快产酸的进程，并抑制对发酵的影响，从而提高醋酸含量，使口感更纯正。

（2） 回答与利用生物技术培养抗虫棉有关的问题

①获得目的基因：若用化学方法合成目的基因，则该方法的前提是目的基因。

②导入目的基因：农杆菌转化法是选择作为载体，为便于筛选导入成功的细胞，载体上带有基因。将农杆菌与外植体共培养期间，要发生农杆菌的附着，，这是为了获得含目的基因的受体细胞。影响转化效率的因素有农杆菌的数量、共培养的时间和温度等环境条件，还有等（至少答出2点）。共培养后，将植物材料转入含植物激素和营养物质的培养基中培养，同时添加以去除附着的农杆菌。

③检测导入是否成功。常用（A.聚合酶链式反应  B.同位素标记法  C.抗原抗体杂交  D.光电比色法）快速筛选出含目的基因的受体细胞。现有抗虫基因整合到一条染色体的转化植株，欲获得纯合植株，常采用的方法有（至少答出2种）。

（1） 回答与柑橘加工与再利用有关的问题：

Ⅰ.柑橘果实经挤压获得果汁后，需用果胶酶处理，主要目的是提高果汁的。为确定果胶酶的处理效果，对分别加入不同浓度果胶酶的果汁样品，可采用3种方法进行实验：①取各处理样品，添加相同体积的，沉淀生成量较少的处理效果好。②对不同处理进行离心，用比色计对上清液进行测定，OD值的处理效果好。③对不同处理进行，记录相同体积果汁通过的时间，时间较短的处理效果好。

Ⅱ.加工后的柑橘残渣含有抑菌作用的香精油及较多的果胶等。为筛选生长不被香精油抑制且能高效利用果胶的细菌，从腐烂残渣中分离得到若干菌株，分别用无菌水配制成，再均匀涂布在LB固体培养基上。配制适宜浓度的香精油，浸润大小适宜并已的圆形滤纸片若干，再贴在上述培养基上。培养一段时间后，测量滤纸片周围抑制菌体生长形成的透明圈的直径大小。从直径的菌株中取菌接种到含有适量果胶的液体培养基试管中培养，若有果胶酶产生，摇晃试管并观察，与接种前相比，液体培养基的下降。

（2） 回答与基因工程和植物克隆有关的问题：

Ⅰ.天然农杆菌的Ti质粒上存在着一段DNA片段（T-DNA），该片段可转移并整合到植物细胞染色体上。为便于转基因植物在组织培养阶段的筛选，设计重组Ti质粒时，应考虑T-DNA中要有可表达的目的基因，还需要有可表达的。

Ⅱ.结合植物克隆技术进行转基因实验，为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。若植物材料对农杆菌不敏感，则可用的转基因方法。

Ⅲ.利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程与利用茎段诱导产生愈伤组织再获得丛状苗的过程相比，前者总培养时间，且不经历过程，因而其遗传性状稳定，是大多数植物快速繁殖的常用方法。

Ⅳ.与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化形成，最终形成根。还可通过改变MS培养基促进生根，如（A.提高蔗糖浓度B.降低培养基浓度C.提高大量元素浓度D.不添加琼脂）。

（1） 果胶是植物以及胞间层的主要成分，不溶于水，是果汁浑浊原因之一。工业化生产果汁时，添加果胶酶可以将果胶分解成可溶性的，使浑浊的果汁变得澄清。果胶酶本质上是（一种酶或一类酶）。

（2） 植物、霉菌、细菌和酵母菌等都能产生果胶酶，其中发酵生产的果胶酶是食品加工中使用量最大的酶制剂。

（3） 温度和pH等条件会影响酶的活性。为探究45℃时果胶酶的活性，在混合前，需对装有果胶酶和草莓原汁的试管分别进行处理。    

（4） 如图是利用配制好的固定浓度的果胶酶，以蒸馏水作为参照，测定不同酶液用量下草莓原汁的澄清度（精密仪器检测，用透光率衡量）。据图分析，在果汁生产中，果胶酶的使用剂量为0.015 mL·kg^－1比较适宜，判断的依据是。

（5） 假如你已经探究了果胶酶的最适温度（45℃），还想进一步探究果胶酶的最适用量，此时实验的自变量是。

（1） 分离纯化棉花黄萎病菌时需配置相应的 ，为菌种生长繁殖提供营养物质，接种必 需 在 旁 进 行 。

（2） 分离土壤根系微生物时，先用 对土壤溶液进行梯度稀释，再用 （填“玻璃刮刀”/“接种环”）涂布平板。涂布前进行梯度稀释的理由是   。       

（3） 果酒制作的菌种是酵母菌，在分离和纯化酵母菌时对培养基灭菌要采用 法，在用液体培养基扩大培养酵母菌时，需要放在摇床上振荡培养，其目的是。

（4） 若利用柚子果皮制取果胶，需预先将柚子果皮在沸水中浸泡一段时间，目的是。研磨、萃取获得果胶初提物，并用无水乙醇处理，使其 ，获得果胶干制品。

（5） 果胶能与 3，5-二甲苯酚发生反应，产生红色物质，可用 法定量测定果胶的含量。测定前，需用活性炭对果胶进行   处理。测定时需要配置一系列溶液 ， 测 定  ， 然 后制作。

（1） 果胶酶在食品加工中用途较广，某食品公司通常从（填“新鲜”或“腐烂”）水果上分离产果胶酶的微生物，其原因是。取水果相应部分，用制成微生物悬液，并进行梯度稀释，然后用将其转移到以果胶为唯一碳源的培养基上培养，分离得到A、B两种产果胶酶的微生物。

（2） 为了鉴定的A、B两种微生物降解果胶的能力，将等量的两种微生物接种于等量相同浓度的经的果胶溶液中进行降解果胶处理。一段时间后，将处理后的果胶溶液离心取上清液，除去残余果胶，用显色剂显色，并在特定的光下测定OD值。若经A组微生物处理后的溶液所测得的OD值较，则说明该种微生物降解果胶的能力较强。

（3） 为了进一步获得更高产果胶酶的微生物，通常对分离得到的微生物悬液进行处理，再进一步分离得到单菌落，发现大多数菌种对果胶的降解能力没有变化，其原因是。

（4） 通过鉴定筛选出高产果胶酶菌种后，可对其进行固定化处理形成固定化菌株，这样处理的优点是；在建立和优化固定化菌种处理工艺时，除考虑温度、pH、作用时间等因素外，还需考虑的主要因素有（至少写出2点）。固定化菌株保存一段时间后，发现降解果胶的能力明显下降，原因可能是（至少写出2点）等。

（1） 在果汁加工中，常加入果胶酶，果胶酶是一种复合酶，主要包括多聚半乳糖醛酸酶。

（2） 果胶酶的使用一方面能够，从而提高出汁率；另一方面能够， 从而提高果汁的澄清度。

（3） 图中果胶酶的用量，从浓度和体积的角度分析，既可以用表示，也可以用来表示。

（4） 图中当果胶酶的用量为0时，果汁体积不为0，其原因是在榨取果汁时， ；最适酶用量一般用表示。