果胶酶的活性测定 知识点题库

（1） 为分离果胶酶产生菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两种成分是．制备的培养基常用法进行灭菌．

K2HPO4	MgSO4	NaNO3	FeSO4		琼脂
0.1g	0.5g	3g	0.01g	2g	15g	加至1L

（2） 科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，震荡混匀，制成悬液．为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行，用法接种于固体培养基上．接种后的培养基状态放人培养箱．

（3） 选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落直径的比值，筛选果胶酶高产菌株．

（4） 将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的（填“上清液”或“沉淀物”）获得粗提的果胶酶．将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性．进行吸光值测定时，需将与等量果胶溶液混合，作为实验的对照．

（1） 制作橙汁时常加入果胶酶，果胶酶能分解果胶来提高橙汁的（答出两点）。为回收溶液中的果胶酶一般采用法将酶固定（答出两种方法）。

（2） 果园土壤中的脂环酸芽孢杆菌，需氧，耐热，生长温度35-80℃。橙汁生产过程中若感染此菌，会影响橙汁品质。为优化橙汁生产工艺，进行了下述研究。

[实验一：脂环酸芽孢杆菌的筛选和鉴定]

实验步骤：

a配制K氏培养基：

b取果园土壤，制备土壤稀释液：

c将土壤稀释液接种在K氏培养基平板上，培养后获得单菌落。

d对获得的目的菌落进行筛选和鉴定。

①K氏培养基的主要成分有酵母膏、蛋白胨和葡萄糖等，其中能提供生长因子的是。

②将上述步骤c初步分离得到的目的菌株制成菌悬液，于80℃水浴中热处理10min后，取0.1mL涂布接种到K氏培养基平板上，45℃培养48h。此操作的目的是。

A.用80℃水浴杀死杂菌和芽孢

B.用80℃水浴进一步筛选出耐热目的菌株

C.分离纯化目的菌株

D.给细菌补充新的营养物质

③用接种环将筛得的目的菌株插入到半固体K氏培养基中，如下左图。接种时为什么要靠近酒精灯火焰：。45℃培养4-5天后进行观察，能够判断是脂环酸芽孢杆菌生长的试管是。

[实验二：脂环酸芽孢杆菌控制方法的研究]

实验步骤：

a称取一定量的抑菌剂，配制成不同浓度的抑菌液。

b将实验一得到的菌株原液适当稀释得到菌株稀释液。

c分别取不同浓度的抑菌液加入到K氏培养液中，再分别加入菌株稀释液形成菌悬液

（各试管中加入的同一种液体均为等量）。培养一段时间后，将上述菌悬液分别接种到K氏平板培养基上。

①实验二中，对照组的设置应该是：。

②为便于检测抑菌剂的抑菌效果，宜采用哪种接种方法?_ ，为什么? 。

（1） 黑曲霉提取液中含有的酶可水解果胶，从而使果汁澄清。该酶是复合酶，包括酶酶酶等。影响酶活性的因素包括：、、等

（2） 固定化柱中的石英砂通过吸附方式将酶固定化，酶被固定后用蒸馏水洗涤固定化柱是为了除去。

（3） 果汁与等量的乙醇混合，如果出现沉淀现象，说明果胶还没有被完全水解。为使果胶完全水解，应将流速调（快或慢）。

（4） 实验后，将洗涤过的固定化柱在低温环境中保存若干天，该固定化柱仍可用于苹果汁制作实验，说明固定化酶可被使用。

（1） 橙子富含丰富的维生素、柠檬酸和抗坏血酸等物质，鲜果和橙子加工品都深受消费者喜爱。回答下列问题：
①变质的橙皮表面会变绿并发软，因为表面长出了青霉菌落，青霉菌会产生使橙皮软化，因此要对此青霉菌进行分离纯化，可以选用以为唯一碳源的培养基。
②利用橙瓤制作橙子酒的过程：橙子去皮→橙瓤榨汁→接种→酒精发酵→橙子酒，接种时用的干酵母需用温水和活化。当发酵瓶中，即表示发酵完毕。 
③橙瓤榨汁也可以直接用于橙子醋的制作，因为在和糖源充足的条件下，醋酸菌能将糖类氧化成醋酸。在生产过程中，发酵瓶中加入的果汁浓度不能过高，原因是。   
④橙子中的柠檬苦素是引起果汁产生苦味的主要原因，利用球形节杆菌产生的柠檬酶处理可消除苦味。某生物实验小组将柠檬酶与海藻酸钠混合后，滴加到一定浓度的氯化钙溶液中，使液滴形成凝胶固体小球，该固定化酶的方法称为。工业生产中，若要将酶固定化，一般不适宜采用该方法，原因是。 

（2） 核酸检测作为确诊新型冠状病毒肺炎的金标准，写入了国家卫健委颁布的诊疗指南里，但依然出现了少数“假阴性”病例，此时采用免疫检测则可以很大程度上避免核酸检测的“假阴性”。请回答下列问题：
①开发核酸检测试剂盒，需要先分离毒株、获得完整基因组序列信息、设计特异性引物和探针的核苷酸序列，再据此用方法直接人工合成特异性引物和探针。
②我国研发的新型冠状病毒核酸快速检测试剂盒的检测原理是：若送检样本中存在病毒，则以病毒RNA为模板，在酶的作用下合成cDNA，再加入互补的荧光探针、2种引物、种脱氧核苷酸和耐热的酶后，cDNA开始扩增，子链延伸至探针处，会水解探针释放出荧光基团产生荧光，荧光监测系统接收到荧光信号从而确诊。   
③我国新型冠状病毒化学发光检测试剂盒采用的是免疫检测，其中的单克隆抗体是由经病毒抗原蛋白免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合制备的细胞产生的，该细胞在体外条件下做大规模培养时，为防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，应采取的措施是。要获得能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞至少要进行次筛选。该试剂盒能快速确诊病例，这是因为单克隆抗体具有等优点。    

（1） 用苹果加工成果汁的过程中，预处理时需要加入果胶酶，目的是。

（2） 在家庭酿制葡萄酒的自然发酵过程中，起主要作用的酵母菌来源于。酒精发酵时一般将温度控制在。家庭酿制葡萄酒的过程中，为防止发酵液被污染，可以采取的措施有（答出3点）。

（3） 与酵母菌相比，醋酸菌在结构上最明显的区别是。当缺少糖源时，醋酸菌生产草果醋的反应式为。为鉴定果醋是否酿制成功可以通过观察菌膜、尝、嗅，还可以通过检测和比较作进一步的鉴定。