PCR技术的基本操作和应用 知识点题库
PCR技术扩增DNA,需要的条件是 ( )
①目的基因 ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④耐高温的DNA聚合酶等
⑤mRNA ⑥核糖体
①目的基因 ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④耐高温的DNA聚合酶等
⑤mRNA ⑥核糖体
A . ①②③④
B . ②③④⑤
C . ①③④⑤
D . ①②③⑥
PCR技术扩增DNA，需要的条件是（ ）
①目的基因 ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④热稳定DNA聚合酶 ⑤mRNA ⑥核糖体
①目的基因 ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④热稳定DNA聚合酶 ⑤mRNA ⑥核糖体
A . ①②③④
B . ②③④⑤
C . ①③④⑤
D . ①②③⑥
PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，下列有关PCR过程的叙述，不正确的是（ ）
A . 变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键
B . 复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成
C . 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP，四种核糖核苷酸
D . PCR与细胞内DNA复制相比所需要的酶的最适温度较高
生物技术与我们的生活息息相关。
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（1） 使用加酶洗衣粉时，水温过低或过高时洗涤效果不好的原因分别是。
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（2） 固定化酶的优点是既能与反应物接触，又能与。酶的固定化一般适合采用法和法。
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（3） PCR技术能把某一DNA分子片段进行扩增，依据的原理是；每次循环需要经过、复性、延伸三步。
资料显示，近10年来，PCR技术（DNA聚合酶链反应技术）成为分子生物实验的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制的特性，在试管中进行DNA的人工复制，在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使分子生物实验所需的遗传物质不再受限于活的生物体．请据图回答：
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（1） 加热至94℃的目的是使DNA样品的键断裂，这一过程在生物体细胞内是通过的作用来完成的．
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（2） 新合成的DNA分子与模板DNA完全相同的原因是、 ．
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（3） 在人体细胞内，DNA的复制发生的场所为 ．
下列关于生物工程中常用的几种酶的叙述中，错误的是（ ）
A . 纤维素酶、果胶酶可分解细胞壁
B . 用于PCR技术的DNA聚合酶耐高温
C . 一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列
D . DNA连接酶可把目的基因与运载体黏性末端的碱基黏合
研究人员用图1中质粒和图2中含目的基因的片段构建重组质粒（图中标注了相关限制酶切割位点），将重组质粒导入大肠杆菌后进行筛选及PCR鉴定。以下叙述不正确的是（ ）
A . 构建重组质粒的过程应选用BclⅠ和HindⅢ两种限制酶
B . 使用DNA连接酶将酶切后的质粒和目的基因片段进行重组
C . 能在添加四环素的培养基上生存一定是含有重组质粒的大肠杆菌
D . 利用PCR鉴定含目的基因的大肠杆菌时应选用引物甲和引物丙
在核酸分子杂交技术中，常常使用已知序列的单链核酸片段作为探针。为了获得B链作探针，可应用PCR技术进行扩增，应选择的引物种类是( )
A . 引物1与引物2
B . 引物3与引物4
C . 引物2与引物3
D . 引物1与引物4
以下为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图。据图分析，下列说法正确的是（ ）
A . 催化①过程的酶是RNA聚合酶
B . 催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，都能耐高温
C . ④过程发生的变化是引物与单链 DNA 结合
D . 如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的 40%，则一个双链DNA中，A与 G之和也占该 DNA 碱基含量的40%
进行PCR反应的具体实验操作顺序应为（ ）
①离心使反应液集中的离心管底部
②用微量移液器在微量离心管中依次加入各组分
③按配方准备好各组分
④进行PCR反应
⑤设计好PCR仪的循环程序
A . ②③⑤④①
B . ①⑤③②④
C . ④②⑤③①
D . ③②①⑤④
滁菊为菊科多年生草本植物，长期营养繁殖易造成病毒积累，导致滁菊花色劣变。某科研小组比较了3种脱毒方法对滁菊体内菊花B病毒（CVB）和菊花矮化类病毒（CSVd）脱除的效果，结果见下表；下图是对不同试管苗进行RT-PCR（逆转录PCR）后的电泳示意图（引物根据CVB的基因序列设计），下列叙述错误的是（ ）
不同脱毒方法对“滁菊”茎尖脱毒率的影响
| 脱毒方法 | 样本数 | 脱除CSVd率 | 脱除CVB率 | 脱除（CSVd+ CVB）率 |
| 茎尖分生组织培养 | 77 | 20.78 | 44.16 | 16.88 |
| 热处理结合茎尖培养 | 71 | 36.62 | 63.38 | 35.21 |
| 病毒唑结合茎尖培养 | 71 | 46.48 | 49.30 | 36.62 |
A . RT-PCR技术中用到的酶有逆转录酶、热稳定DNA聚合酶
B . 试管苗2、5尚未脱毒成功，3、4已成功脱去CVB病毒
C . 只脱除CSVd病毒时，可选择病毒唑结合茎尖分生组织培养
D . 热处理、病毒唑处理对试管苗脱毒率和存活率都有显著作用
基因工程的相关技术可用于病毒检测，也可用于制备疫苗。利用荧光PCR技术检测是否感染某种RNA病毒时，基本操作流程:提取病毒的RNA→荧光PCR扩增反转录DNA→荧光检测。请回答下列问题。
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（1） 分离病毒的RNA通常在冰浴条件下进行，目的是抑制的活性，防止病毒的RNA降解。荧光PCR反应体系中需要加入的酶和原料是。为保证反应体系只扩增病毒特异性核酸序列，应先根据病毒的特异性核酸序列设计。
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（2） 荧光染料能掺入DNA双链中发出荧光，在游离状态下不发出荧光。若检测到荧光量达到某个临界值，则代表阳性，说明。若检测出现“假阴性”现象，原因可能是。
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（3） 某病毒的E蛋白和P蛋白会引起机体产生特异性免疫反应。构建重组活病毒载体疫苗时，获取某病毒的插入腺病毒的基因组中。通过重组腺病毒感染动物可使其获得免疫力，原因是。
PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。下列有关该技术的叙述，不正确的是（ ）
A . PCR技术的原理是DNA复制
B . 变性过程中利用高温使DNA双链解开
C . 复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的
D . 延伸过程需要Taq酶、ATP、四种核糖核苷酸
实时荧光定量RT-PCR技术需要在常规PCR基础上添加荧光染料或荧光探针，荧光染料能特异性掺入DNA双链中，从而发出荧光信号。在新冠病毒肺炎疫情期间，可以通过实时荧光定量RT-PCR技术进行核酸检测。下列相关叙述正确的是（ ）
A . 图中的探针可能是利用荧光分子标记的新冠病毒独特的基因序列
B . 核酸检测是通过检测荧光信号来确定样本中是否有病毒核酸的
C . PCR技术利用了DNA双链复制的原理，需要解旋酶和耐高温的DNA聚合酶的催化
D . 用荧光RT-PCR技术测定病毒的核酸具有特异性
PCR是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术，与人体细胞内DNA分子复制相比，下列有关叙述错误的是（ ）
A . 都遵循碱基互补配对原则
B . DNA聚合酶作用的最适温度不同
C . 都是边解旋边复制的过程
D . 复制方式都是半保留复制
多聚酶链式反应（PCR）可自动化重复进行图1所示的①～③步骤，每完成一次①～③步骤称为完成一个循环。
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（1） 完成PCR过程所用的Taq酶作用于键，完成该过程的三次循环后产生的DNA分子中含有引物B的比例为。
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（2） 某研究小组拟用PCR技术和引物（填引物的序号）从图2所示DNA分子中扩增出编码蛋白质H的基因，并开展后续研究。
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（3） 通过上述PCR反应获得编码蛋白质H的基因片段后，拟将其插入质粒pZHY1中构建重组DNA分子pZHY2。已知在pZHY1上存在EcoRⅠ、BamHⅠ、KpnⅠ、XbaⅠ4种限制酶的识别序列（如表），则应选用的限制酶组合是___________。
EcoRⅠ
BamHⅠ
KpnⅠ
XbaⅠ
G↓AATTC
CTTAA↑G
G↓GATCC
CCTAG↑G
GGTAC↓C
C↑CATGG
T↓CTAGA
AGATC↑T
A . BamHⅠ和EcoRⅠ B . EcoRⅠ和XbaⅠ C . EcoRⅠ和KpnⅠ D . BamHⅠ和KpnⅠ -
（4） 将重组DNA分子pZHY2导入大肠杆菌后，就可通过大规模培养大肠杆菌，然后制备纯化的蛋白质H。若要制备抗蛋白质H的单克隆抗体，相关说法中错误的有______。A . 可以用上述步骤所得纯化的蛋白质H作为抗原 B . 从动物的脾脏收集B淋巴细胞，并使之与杂交瘤细胞融合 C . 单克隆抗体是经选择性培养基的筛选所得到的B淋巴细胞，进行培养而产生的抗体 D . 电刺激可用于制备单克隆抗体和植物体细胞杂交，也可用于动物体细胞核移植
据报道，美国科研人员通过基因转移技术，从根本上治愈了实验小鼠所患的Ⅰ型糖尿病，这种技术把选定的X基因输入胰腺，这些基因随后得到整合并促使消化系统和其他类型的细胞制造胰岛素，请回答下列问题：
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（1） 在基因工程中，X基因称为。利用PCR技术扩增X基因时，需要在反应体系中添加的有机物质是、、4种脱氧核苷酸和热稳定的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。
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（2） 将X基因导入小鼠体内之前，需要操作的核心步骤是，此步骤最常用的运载工具是，所需要的酶是限制酶和。
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（3） X基因的检测可从分子水平和个体水平两方面进行，在分子水平上通常采用技术检测X基因是否导入受体细胞，在个体水平上应检测。
科研人员试图通过相关生物工程技术，利用大肠杆菌生产人胰岛素，操作思路如下图。请回答下列问题：
人染色体DNA ①人胰岛素基因②与质粒重组③导人大肠杆菌细胞④获得人胰岛素
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（1） 通过①过程获得的人胰岛素基因可利用技术在体外大量扩增，与DNA体内复制相比，该技术需要用到的特殊酶是。如果用反转录的方法获得人胰岛素基因，模板mRNA一般取自人的细胞。
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（2） ③过程在导入重组质粒之前，可用处理大肠杆菌细胞，目的是。
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（3） 从大肠杆菌培养液中分离到的人胰岛素需要进行后期加工，原因是。
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（4） 利用图示方法生产人胰岛素的过程（填“属于”或“不属于”）蛋白质工程，理由是。
2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取，产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。
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（1） 提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是，前提是必须知道该基因的部分核苷酸序列，以便根据这一序列设计合成。在PCR扩增仪的反应体系中添加的有机物质除了相关酶外，还要添加、及4种dNTP。
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（2） 如果用青蒿某个时期总RNA逆转录产生的cDNA片段与载体连接后，储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的。这些cDNA与青蒿细胞中对应基因的碱基序列（填“相同”或“不同”）。
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（3） 将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：
用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割的原因是、。构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是酶的识别和结合位点。
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（4） 研究人员通常采用法将该突变基因导入青蒿细胞内。
早期胚胎细胞异常凋亡是目前克隆猪成功率低的主要原因。用实时荧光逆转录PCR技术（RT－qPCR）检测细胞凋亡抑制基因Bcl－2的表达水平，有助于了解胚胎发育不同时期Bcl－2表达水平与细胞凋亡的关系。下列说法正确的是（ ）
A . 对重组细胞进行培养时需加入血清等天然成分
B . 需要用激素对受体进行同期发情处理
C . 利用RT－qPCR技术检测细胞凋亡抑制基因Bcl－2的表达水平，需提取细胞或组织中的RNA，并在逆转录酶的作用下逆转录成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增
D . 胚胎在受体子宫发育过程中，其遗传特性不受影响
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