动物细胞工程的常用技术与应用 知识点题库
动物细胞培养是动物细胞工程的基础，如右图所示，a、b、c 表 示现代工程技术，①、②、③分别表示其对应的结果，请据图回答下面说法正确的是( )
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③合成培养基需加血浆 ④温度与动物体温相近
⑤需要O2 ， 不需要 CO2 ⑥CO2能调节培养液pH
植物细胞工程 | 动物细胞工程 | |
①技术手段 | 植物组织培养、植物体细胞杂交 | 动物细胞培养和融合、单克隆抗体制备等 |
②特殊处理 | 机械法去除细胞壁 | 胰蛋白酶处理制备细胞悬浮液 |
③融合方法 | 物理方法、化学方法 | 物理方法、化学方法、生物方法 |
④典型应用 | 人工种子、杂种植株 | 单克隆抗体的制备 |
⑤培养液区别 | 蔗糖是离体组织赖以生长的成分 | 动物血清不可缺少 |
（1）上述过程中主要应用到的动物细胞工程有 ；若将某经过修饰的基因导人其中的部分胚胎干细胞，常用的方法是 ；
（2）在使用合成培养基进行胚胎干细胞培养时，通常需加入 等天然成分，除了需要保证被培养的细胞处于无菌、无毒及充足的氧气外，还要提供适宜的 ．如果将此细胞用于检测有毒物质是否引起了细胞基因突变，可用 技术；如果想检测不同浓度的有毒物质引起细胞染色体变异的程度，则可以检测出变异细胞来作为指标．
（3）科学家欲进行胚胎分割移植，则应该选择发育良好、形态正常的 或囊胚，将其移入盛有操作液的培养皿中，然后，用分割针进行分割．
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（1） 应从人的肝细胞中提取并分离mRNA，逆转录成单链DNA。根据已知的抗凝血酶Ⅲ基因的碱基序列设计特异性，经PCR和电泳，可得到大量抗凝血酶Ⅲ基因，此过程所用原料为。
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（2） 重组后的人抗凝血酶Ⅲ基因表达载体由山羊β-酪蛋白基因启动子、抗凝血酶Ⅲ基因、标记基因和终止子组成，其中决定了人抗凝血酶Ⅲ基因只能在山羊乳腺细胞中特异性表达。
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（3） 山羊的ES细胞来自早期胚胎干细胞。在饲养层细胞上培养时，ES细胞具有的特性。将重组人抗凝血酶Ⅲ基因表达载体包埋在由磷脂双分子层构成的脂质体内并转染ES细胞时，目的基因表达载体进入ES细胞的方式为。
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（4） 对山羊进行同期发情和超数排卵处理，得到代孕母羊和多个卵母细胞，当卵母细胞培养至时，可去核并移入上述ES细胞的细胞核，完成核移植。为选择雌性胚胎，可在囊胚时取细胞做DNA分析用以鉴定性别。检测羊奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ的方法是。
（要求与说明：A、B系大鼠即为A、B品系大鼠。实验条件适宜。皮肤存活率是指移植存活的皮肤片数占总移植皮肤片数的百分比。排斥反应指移植物作为“非己”成分被免疫系统识别、破坏和清除的免疫反应）
实验思路：
（ 1 ）实验分组与处理：
组1：取A系大鼠的皮肤片移植到自身的另一部位。
组2：取A系大鼠的皮肤片移植到B系大鼠。
组3：取与组2相同处理并出现排斥反应后的B系大鼠的T淋巴细胞，注射到未处理的B系大鼠并将A系大鼠的皮肤片移植到该大鼠。
（ 2 ）将上述各组若干只处理后的大鼠进行饲养，每隔一定时间观测皮肤片的存活状况并记录，计算皮肤存活率。
回答下列问题：
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（1） 预测实验结果（以坐标曲线图形式 表示实验结果，其中横坐标为皮肤移植后时间）:
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（2） 分析与讨论：
①上述实验思路中，移植皮肤的受体大鼠是。
②为了进一步验证大鼠对移植皮肤起排斥反应的主要是T淋巴细胞，在实验思路的分组和处理中，若设置组4，其处理是给予大鼠免疫抑制剂，再移植皮肤片，用免疫抑制剂处理的理由是，还可设置组5，其处理是，理由是。
③效应细胞毒性T细胞的生物学功能有。
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（1） 步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的。
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（2） 步骤②中，重组胚胎培养到 期时，可从分离出ES细胞。
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（3） 步骤③中，需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以利用扩增Rag2基因片段。用Hind III和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有和的酶切位点。
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（4） 为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的，用进行杂交实验。
材料一：日前，英国研究人员利用最新的3D打印技术，“打印”出了活体胚胎干细胞。实验证明，这些干细胞仍保持着人体胚胎干细胞的正常分化能力。科学家使用活体卵子及皮肤成纤维细胞，在实验室已成功克隆出了数个人体胚胎，进而可以开发出有研究价值的胚胎干细胞。请回答：
材料二：不断恶化的生态环境，正在对人类的生存和发展构成严重的威胁。运用生态工程可对遭到破坏的生态环境进行修复和重建。
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（1） 自然状况下的胚胎干细胞是由哺乳动物的中分离出来的一类细胞。
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（2） 上述过程中要应用到的动物细胞工程技术有。
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（3） 将胚胎干细胞用于检测有毒物质是否引起了基因突变，在分子水平上需要采用技术。
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（4） 胚胎移植是否成功，与供体和受体的生理状况有关。在胚胎移植操作中，应对供体和受体母畜进行处理才能使胚胎在移植前后所处的生理环境保持一致。
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（5） 生态工程建设的目的是遵循自然界的规律，充分发挥资源的生产潜力，防止，达到生态效益与经济效益的同步发展。生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理中的3项：。
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（1） 获取人的抗体基因可从活化的B细胞中提取，经逆转录形成cDNA，再利用PCR技术扩增目的基因，有时需要在引物的5'端设计（填“限制酶”“DNA连接酶”或“RNA聚合酶”）识别序列，以便构建重组DNA分子。
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（2） 在PCR反应体系中，加入dNTP（dCTP、dATP、dGTP和dTTP）的作用是。
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（3） 在噬菌体抗体库的构建过程中，理论上可以不利用Ca2＋处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞，依据是。
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（4） 从噬菌体抗体库中筛选特异性抗体的方法是，其原理是。与利用杂交瘤技术制备单克隆抗体相比，噬菌体抗体库技术省去了操作，使制备更简单易行。
