测定某种微生物的数量 知识点题库
①配置培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）；
②制作无菌平板；
③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；
④将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数．
回答下列问题：
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（1） 该培养基中微生物所需的氮来源于．若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是．
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（2） 步骤③中，实验组的操作是．
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（3） 若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了现象．若将30（即36﹣6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法（填“正确”或“不正确”）．
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（1） 该实验中，在以为唯一氮源的培养基中加入指示剂，能产生脲酶的细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成色．
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（2） 在接种前需要添加空白对照组以检测培养基是否被污染，该空白对照组应采取的操作要求和观察指标是 ． 若在实验中，一同学的平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此实验中出现了现象．该同学将30（即36﹣6）个/平板作为本组菌落数的平均值，他的做法正确/不正确）．
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（3） 另一同学在五个培养基平板下均接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13，156，462，178和191．该过程采取的接种方法是 ， 每克土壤样品中的细菌数量为个．
①将腊肉研磨后离心处理，取一定量上清液放入分光光度计（测定发光强度的仪器）反应室内，加入适量的荧光素和荧光素酶，在适宜条件下进行反应；
②记录发光强度并计算ATP含量；
③测算出细菌数量．
分析并回答下列问题：
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（1） 荧光素接受提供的能量后就被激活，在荧光素酶的作用下形成氧化荧光素并且发出荧光．根据发光强度可以计算出生物组织中ATP的含量，原因是发光强度与ATP含量成（正比/反比）；根据ATP含量进而测算出细菌数量的依据是：每个细菌细胞中ATP含量 ．
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（2） “荧光素﹣﹣荧光素酶生物发光法”中涉及的能量转换是；生物细胞中ATP的水解一般与（吸能反应或放能反应）相联系．
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（3） 研究人员用不同条件处理荧光素酶后，测定酶浓度与发光强度如图所示．其中高浓度盐溶液经稀释后酶活性可以恢复，高温和Hg2+处理后酶活性不可恢复．若要节省荧光素酶的用量，可以使用处理；Hg2+处理 ．
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（1） 显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用染色．微生物A产生的油脂不易挥发，可选用（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取．
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（2） 为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以为碳源的固体培养基进行培养．从功能上划分该培养基属于培养基
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（3） 若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用直接计数；若要测定其活菌数量，可选用法进行计数．
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（4） 为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，℃条件下该酶活力最小．为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕℃设计后续实验．
编号 | 实验名称 | 实验材料 | 实验操作或现象 |
① | 观察植物细胞的质壁分离 | 紫色洋葱外表皮、蔗糖溶液等 | 原生质层呈紫色，各组成部分结构清晰 |
② | 检测生物组织中的脂肪 | 花生子叶、苏丹Ⅲ染液等 | 在高倍镜下可见细胞中被染成橘黄色的脂肪液滴 |
③ | 观察细胞有丝分裂 | 洋葱根尖、龙胆紫溶液等 | 在高倍镜的同一个视野中，可见分裂前期、中期、后期、末期各时期细胞呈正方形，排列紧密 |
④ | 探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化 | 酵母菌、血细胞计数板等 | 在10×目镜、40×物镜下的一个视野中完成对整个计数室中酵母菌的计数 |
( 1 )制菌种步骤1：挑选白色斑点较多的葡萄，取皮加入培养液中，获得提取液。
①葡萄上的白色斑点很可能是。
步骤2：菌种纯化
②图乙所示的菌种纯化方法是。
步骤3：将菌种用培养液扩大培养。
③若要对培养液中的酵母菌计数可采用血球计数板操作，方法是：先将放在计数室上，用吸管吸取稀释后的培养液滴于其边缘，让培养液自行渗入，在显微镜下计数；也可采用图甲所示的方法。在相同条件下，采用上述两种方法对同一培养液进行计数时，在操作和计算均正确的前提下，发现前者计数结果明显偏大，可能的原因是。
( 2 )挑选葡萄冲洗并晾干。
( 3 )破碎装瓶：不要将瓶装满，要留1/3的空间。
( 4 )接种并加糖发酵：所加糖量不要太多，可按照10∶1的比例加糖。若所加糖量过多，可能会导致。
( 5 )过滤：约一星期后将发酵液用尼龙布反复过滤，充分去除渣滓。
( 6 )密封：后期发酵。
已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。欲从土壤中筛选出能高效降解有机物X的微生物，回答下列问题。
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（1） 在配制培养基时应以作为唯一碳源。
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（2） 微生物分离实验中常用的接种工具有。在接种前，通常要随机选取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是。用平板培养细菌时一般需要将平板(填“倒置”或“正置”)。
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（3） 单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是。
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（4） 甲．乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中能高效降解有机物X的微生物数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：
甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124；
乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是157、172和178，取平均值169。
你认为这两位同学的结果中，(填“甲同学”或“乙同学”)的结果可信度低，其原因是 。
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（1） 火龙果致腐微生物菌株分离与纯化
称取25g自然条件下完全腐烂的红心火龙果，置于225mL无菌生理盐水中，振荡30min，取1mL稀释6个梯度（101~106倍稀释），分别涂布于固体平板上，该接种方法称为，再将平板置于28℃条件下培养1～7d，挑取不同形态的单菌落分别在试管中培养，置于临时保存。
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（2） 致腐菌回接火龙果实验
用酒精擦拭火龙果表面，其目的是。将不同的致腐菌依次制成菌液，将其回接到新鲜无腐烂红心火龙果上，同时以为对照组，晾干后置于室温条件下储藏，每隔3d进行观察和记录，最终选取致腐能力强的致腐菌，且培养成菌落。
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（3） 致腐菌鉴定
对筛选得到的致腐菌的菌落初步从（答出2点）等方面进行形态学鉴定，之后利用分子生物学、生物信息学等分析方法进行鉴定后，发现一类是青霉属中的扩展青霉，另一类是附球属中的黑附球菌。扩展青霉和黑附球菌细胞结构的显著区别在于。
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（4） 拮抗实验：研究发现，解淀粉芽孢杆菌上清液对青霉菌株有一定的拮抗抑制作用，为探究最佳拮抗浓度，请写出实验思路：。
| 组别 细胞密度（×107cfu·mL-1） 菌株 | 对照组 | 单独培养组 | 三种细菌混合培养组 |
| 解磷巨大芽孢杆菌 | 0 | 8.49 | 8.24 |
| 圆褐固氮菌 | 5.09 | 3. 35 | |
| 解钾胶质芽孢杆菌 | 2.81 | 1.41 |
注：cfu· mL-1指每毫升祥品中培养出的菌落数
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（1） 果酒酿造过程中，起主要作用的微生物是酵母菌，酵母菌的异化作用类型是，发酵产生的果酒在醋酸菌的作用下会进一步转变为醋酸，与酒精发酵的条件相比，醋酸发酵需要(答出2点)
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（2） 工业上生产酒精可采用法固定酵母细胞，细胞固定化技术的优点是(答出2点)。
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（3） 若要测定果酒发酵液中的酵母菌密度，进行下图所示操作。
将发酵液用法接种到培养基，一段时间后，培养基A、B、C中菌落数分别为36、40、35，表明IL发酵液中的酵母菌数量约为个，统计结果比酵母菌的实际数目偏(大或小)。
