酶活力测定的一般原理和方法 知识点
①概念：酶活力也称为酶活性，是指酶在催化一定的化学反应时表现出来的能力。
②表示方法：通常用酶促反应的速率，即酶促反应过程中单位时间内底物的减少量或产物的生产量来表示。
③影响酶活力的因素：高温、强酸、强碱、重金属盐或紫外线等都会影响酶的活力。
探究果胶酶活力因素的实验设计
二、探究温度和pH对果胶酶活力的影响
(1)实验原理
①当酶处于最适温度或最适pH时，酶的活力最高。
②若温度过高、过酸或过碱，则导致酶变性失活。
③在一定范围内，果肉的出汁率和果汁的澄清度与果胶酶的活力成正相关。
(2)实验操作流程
温度或pH对果胶酶活力的影响
(3)结果分析
①根据实验数据绘制出温度和pH对果胶酶活力(用酶反应速度表示)影响的曲线图(如图a、b)；不同果胶酶用量对出汁率影响的曲线图(在浓度和体积相同的条件下，如图c)；并最终得到果胶酶最适温度、pH以及果胶酶的最适用量。
②由于初次实验的梯度变量选择目的性不强，选择的范围有可能出现过高或过低的情况，这可以从画出的曲线中反映出来，如图所示，实验中可以根据出现的曲线进一步选择合适的梯度变量。
酶活力测定的一般原理和方法 知识点题库
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（1） Ⅰ．现有磨浆机、烧杯、滴管、量筒、玻璃棒、漏斗、纱布、苹果、试管、蒸馏水、质量分数为2%的果胶酶溶液、一定浓度的盐酸和氢氧化钠溶液，下表是某小组利用上述材料进行的有关实验：（“/”表示不加），请回答下列问题：
操作顺序
项目
烧杯
甲
乙
丙
丁
1
加入苹果泥
20ml
20ml
20ml
20ml
2
①
2ml
/
2ml
2ml
3
加入不同液体
2ml蒸馏水
2ml蒸馏水
2ml盐酸溶液
2ml氢氧化钠溶液
4
水浴恒温，玻璃棒搅拌
15分钟
15分钟
15分钟
15分钟
（1）表中①处的内容是 ．
（2）比较烧杯甲、丙、丁的结果可知： 能影响酶的活性．
（3）若要验证果胶酶的作用，应把 两个烧杯同时取出并过滤相同时间，观察并比较 ．
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（2）
Ⅱ．从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的是 法；一般情况下，提取胡萝卜素时，提取效率与原料颗粒的含水量成 比；将提取的胡萝卜素粗品通过纸层析进行鉴定的结果如图所示，请据图回答．A、B、C、D四点中，属于标准样品的样点是 ；乙代表的物质是 ．
（1）据图1可知，本实验研究的课题是 ．
（2）据图1，在40℃至60℃范围内，热稳定性较好的酶是 ．高温条件下，酶容易失活，其原因是 ．
（3）下表是图一所示实验结果统计表，由图1可知表中③处应是 ，⑧处应是 ．
温度（℃） | ① | ② | ③ | ④ | ⑤ | ⑥ | ⑦ |
A酶活性（mmol•S﹣1） | 3.1 | 3.8 | 5.8 | 6.3 | 5.4 | 2.9 | 0.9 |
B酶活性（mmol•S﹣1） | 1.1 | 2.2 | 3.9 | ⑧ | 3.4 | 1.9 | 0 |
（4）图2表示30℃时B酶催化下的反应物浓度随时间变化的曲线，其他条件相同，在图2上画出A酶（浓度与B酶相同）催化下的反应物浓度随时间变化的大致曲线 ．
（5）适宜条件下，取一支试管加入A酶和蛋白酶溶液并摇匀，一段时间后加入纤维素，几分钟后加入新制斐林试剂并水浴加热，结果试管中没有产生砖红色沉淀，原因是 ．
【实验目的】比较甲、乙、丙三种微生物所产生的淀粉酶的活性．
【实验材料】科研人员提供的三种微生物淀粉酶提取液（提取液中酶浓度相同）等．
试管1 | 试管2 | 试管3 | 试管4 | |
蒸馏水 | 2 | 2 | 2 | A |
pH=8缓冲液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
淀粉溶液 | 1 | 1 | 1 | 1 |
甲生物提取液 | 0.3 | |||
乙生物提取液 | 0.3 | |||
丙生物提取液 | 0.3 | |||
总体积 | 3.8 | 3.8 | 3.8 | B |
【实验步骤】
（1）取四支试管，分别编号，按下表要求完成操作（表中各溶液的体积单位为mL）
（2）将上述四支试管放入37℃的水浴，保温10min．
（3）在上述四支试管冷却后滴入碘液．
（4）观察比较四支试管的颜色及其深浅．
【实验结果】（“+”表示颜色变化的深浅，“﹣”表示不变色）
试管1 | 试管2 | 试管3 | 试管4 | |
颜色深浅程度 | ++ | ﹣ | + | C |
回答相关问题：
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（1） 填写表中的数值：A ．
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（2） 该实验的自变量是 ，无关变量有 以及淀粉溶液的量和浓度等．
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（3） 本实验还可以用 试剂来检测生成物的量．若用该试剂检验，颜色变化最大的试管是 ．
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（4） C的颜色变化深浅程度应为 （用“+”或“﹣”的数量表示）．
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（5） 根据实验结果可知，三种酶的活性大小的关系为 ．三种酶的活性存在差异的根本原因是 ．
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（1） 茶多酚最可能存在于植物细胞的 （填细胞结构）
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（2） 医学研究表明，茶叶中茶多酚能提高超氧化物岐化酶的活性，有利于机体对自由基脂质氧化物的清除，故有较强的抗衰老作用．人的细胞在衰老过程中不会出现的变化是（ ）A . 细胞内有些酶活性降低 B . 细胞内色素减少 C . 细胞内水分减少 D . 细胞内呼吸速度减慢
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（3） 在制作绿茶工艺中，有一道工序是迅速将温度提高到70℃左右，目的是 ，从而保持茶叶鲜绿的颜色．
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（4） 在制作红茶时，需将茶叶保持在30℃﹣40℃范围内发酵一段时间，其原理是 ，从而使茶叶变为红褐色，即为红茶．
【实验目的】比较甲、乙、丙三种微生物所产生的淀粉酶的活性
【实验原理】略．
【实验材料】三种微生物淀粉酶提取液（提取液中酶蛋白浓度相同）等
【实验步骤】
a．取四支试管，分别编号；
b．按表内要求进行操作；
试管1 | 试管2 | 试管3 | 试管4 | |
蒸馏水 | 2 | 2 | 2 | A |
pH=8缓冲液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
淀粉溶液 | 1 | 1 | 1 | 1 |
甲生物提取液 | 0.3 | |||
乙生物提取液 | 0.3 | |||
丙生物提取液 | 0.3 | |||
总体积 | 3.8 | 3.8 | 3.8 | B |
c．将上述四支试管放入37℃的水浴，保温1小时；
d．在上述四支试管冷却后滴入碘液；
e．观察比较实验组的三支试管与对照组试管的颜色及其深浅
【实验结果】（注：“+”显色，“++”显色更深；“﹣”不显色）
试管1 | 试管2 | 试管3 | 试管4 | |
颜色深浅程 | ++ | ﹣ | + | C |
回答下列问题：
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（1） 表中A的数值为 ， C的颜色深浅程度（用“+”或“﹣”表示）．
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（2） 该实验的自变量是 ， 无关变量有（写出2种即可）．
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（3） 除了用碘液检验淀粉的剩余量来判断实验结果外，还可以用试剂来检测生成物的量，若用该试剂检验，颜色变化最深的试管是 ．
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（1） 据图1可知，本实验研究的课题是．
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（2） 据图1，在40℃至60℃范围内，热稳定性较好的酶是．高温条件下，酶容易失活，其原因是．
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（3） 下表是图一所示实验结果统计表，由图1可知表中③处应是，⑧处应是．
温度（℃）
①
②
③
④
⑤
⑥
⑦
A酶活性（mmol•S﹣1）
3.1
3.8
5.8
6.3
5.4
2.9
0.9
B酶活性（mmol•S﹣1）
1.1
2.2
3.9
⑧
3.4
1.9
0
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（4） 图2表示30℃时B酶催化下的反应物浓度随时间变化的曲线，其他条件相同，在图2上画出A酶（浓度与B酶相同）催化下的反应物浓度随时间变化的大致曲线．
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（5） 适宜条件下，取一支试管加入A酶和蛋白酶溶液并摇匀，一段时间后加入纤维素，几分钟后加入新制斐林试剂并水浴加热，结果试管中没有产生砖红色沉淀，原因是．
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（1） 显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用染色．微生物A产生的油脂不易挥发，可选用（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取．
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（2） 为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以为碳源的固体培养基进行培养．从功能上划分该培养基属于培养基
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（3） 若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用直接计数；若要测定其活菌数量，可选用法进行计数．
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（4） 为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，℃条件下该酶活力最小．为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕℃设计后续实验．
取穗发芽时间相同、质量相等的红、白粒小麦种子，分别加蒸馏水研磨、制成提取液（去淀粉），并在适宜条件下进行实验．实验分组、步骤及结果如下：
分组 步骤 | 红粒管 | 白粒管 | 对照管 | |
① | 加样 | 0.5mL提取液 | 0.5mL提取液 | C |
② | 加缓冲液（mL） | 1 | 1 | 1 |
③ | 加淀粉溶液（mL） | 1 | 1 | 1 |
④ | 37℃保温适当时间，终止酶促反应，冷却至常温，加适量碘液显色 | |||
显色结果 | +++ | + | +++++ | |
注：“+”数目越多表示蓝色越深
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（1） 显色结果表明：淀粉酶活性较低的品种是；据此推测：淀粉酶活性越低，穗发芽率越．步骤①中加入的C是，步骤②中加缓冲液的目的是．
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（2） 小麦淀粉酶包括α淀粉酶和β淀粉酶，为进一步探究其活性在穗发芽率差异中的作用，设计了如下实验方案：
X处理使β淀粉酶失活的目的．若Ⅰ中两管显色结果无明显差异，且Ⅱ中的显色结果为白粒管颜色显著红粒管（填“深于”或“浅于”），则表明α淀粉酶活性是引起这两种小麦穗发芽率差异的主要原因．
Ⅰ．利用大肠杆菌表达BglB酶
Ⅱ．温度对BglB酶活性的影响
Ⅲ．利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性
在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率．经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因．
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（1） PCR扩增bglB基因时，选用基因组DNA作模板．
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（2） 图1为质粒限制酶酶切图谱．bglB基因不含图中限制酶识别序列．为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入和不同限制酶的识别序列．
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（3） 大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为．
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（4） 据图2、3可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在（单选）．
A.50℃ B.60℃ C.70℃ D.80℃
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（5） 与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中（ ）（多选）．A . 仅针对bglB基因进行诱变 B . bglB基因产生了定向突变 C . bglB基因可快速累积突变 D . bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变．
表1
操作步骤 | 操作方法 | 试管A | 试管B | 试管C |
1 | 加淀粉溶液 | 2mL | 2mL | 2mL |
2 | 加淀粉酶溶液 | 1mL | 1mL | 1mL |
3 | 温度处理 | 60℃ | 100℃ | O℃ |
4 | 加碘液 | 2滴 | 2滴 | 2滴 |
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（1） 表1所示为探究的实验。
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（2） 该实验的正确步骤为（用表2中操作步骤中的序号表示）。
表2
操作步骤
操作方法
试管A
试管B
1
加淀粉溶液
2mL
2
加蔗糖溶液
2mL
3
加斐林试剂甲
2mL
2mL
4
加斐林试剂乙
数滴
数滴
5
加淀粉酶溶液
1mL
1mL
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（3） 表2所示为探究的实验。
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（4） 请修正操作方法步骤中的错误：
①
②
③
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（5） 该实验结果能否用碘液检测?。
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（1） M培养基若用于某真菌的筛选，则培养基中应加入四环素以抑制的生长，加入了四环素的培养基属于培养基。
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（2） M培养基为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除碳源外还有。碳源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有（答出两点即可）。
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（3） 从得到的上述真菌中分离、纯化某特定的酶，常用的方法是电泳法和凝胶色谱法。电泳法分离酶，影响电泳速度的因素有（答出两点即可）。凝胶色谱法最先分离出来的是分子量（填“大”或 “小”）的酶分子，原因是。
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（4） 酶的活性指酶催化一定化学反应的能力，酶反应速度指。
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（1） 果胶是植物以及胞间层的主要成分，不溶于水，是果汁浑浊原因之一。工业化生产果汁时，添加果胶酶可以将果胶分解成可溶性的，使浑浊的果汁变得澄清。果胶酶本质上是（一种酶或一类酶）。
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（2） 植物、霉菌、细菌和酵母菌等都能产生果胶酶，其中发酵生产的果胶酶是食品加工中使用量最大的酶制剂。
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（3） 温度和pH等条件会影响酶的活性。为探究45℃时果胶酶的活性，在混合前，需对装有果胶酶和草莓原汁的试管分别进行处理。
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（4） 如图是利用配制好的固定浓度的果胶酶，以蒸馏水作为参照，测定不同酶液用量下草莓原汁的澄清度（精密仪器检测，用透光率衡量）。据图分析，在果汁生产中，果胶酶的使用剂量为0.015 mL·kg－1比较适宜，判断的依据是。
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（5） 假如你已经探究了果胶酶的最适温度（45℃），还想进一步探究果胶酶的最适用量，此时实验的自变量是。
①使用两种洗衣粉的量相同②被洗涤的布料及污渍状态相同 ③洗涤所用的水量及水温（一般为常温）应相同 ④加入适量的复合酶洗衣粉 ⑤浸泡和洗涤的时间相同
